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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA样品中生理盐水有这么大的影响么？
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feiliulei

银虫 (小有名气)

[求助] ELISA样品中生理盐水有这么大的影响么？ 已有4人参与

蛋白A的 pg级别的定量检测（0—1000pg），试剂盒Enzo Life Sciences
试剂盒提供样品稀释液，如果用试剂盒里面的样品稀释液配制蛋白A对照品，回收率很好（85%-115%）。四参数拟合曲线r2=0.999
可是用生理盐水配制蛋白A对照品，10ng的蛋白A才能被检测到，0pg—10ng的蛋白A样品吸光度均低于空白值（样品稀释液空白平均值0.2022）
生理盐水配制的蛋白A对照品用样品稀释液稀释，吸光度大于空白值，但是回收率太低了。
请教高手啊，这么一个情况方法学验证做不下去了啊 ，我们的样品一般用生理盐水溶解
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1楼 2014-08-20 17:16:20
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feiliulei

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by feiyue122 at 2015-01-20 15:53:25
请问，你用的是什么方法啊！双抗体夹心法码，能不把标准曲线的数据说一些

是的，双抗夹心。
具体数据我明天截图给你看吧

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6楼2015-01-20 20:13:17
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343680817

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试剂盒里面给了稀释液的，你为什么要用生理盐水呢？
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2楼2014-10-28 22:19:07
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feiliulei

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 343680817 at 2014-10-28 22:19:07
试剂盒里面给了稀释液的，你为什么要用生理盐水呢？

如果待测样品浓度很低，稀释后低于检测限，那么检测结果的可信度在哪里？
如果样品浓度稍高，稀释多少倍检测结果才可信呢？

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3楼2014-10-28 23:17:11
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343680817

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by feiliulei at 2014-10-28 23:17:11
如果待测样品浓度很低，稀释后低于检测限，那么检测结果的可信度在哪里？
如果样品浓度稍高，稀释多少倍检测结果才可信呢？
...

试剂盒有它的灵敏度，尽量不要稀释到低于检测限；如果确实低于检测限了那就是低于了，那样品中Protein A含量应该很少了。
高浓度样品的稀释倍数可以自己去做方法学验证。
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4楼2014-10-29 21:06:07
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