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feiliulei

银虫 (小有名气)

[求助] ELISA样品中生理盐水有这么大的影响么? 已有4人参与

蛋白A的 pg级别的定量检测(0—1000pg),试剂盒Enzo Life Sciences
试剂盒提供样品稀释液,如果用试剂盒里面的样品稀释液配制蛋白A对照品,回收率很好(85%-115%)。四参数拟合曲线r2=0.999
可是用生理盐水配制蛋白A对照品,10ng的蛋白A才能被检测到,0pg—10ng的蛋白A样品吸光度均低于空白值(样品稀释液空白平均值0.2022)
生理盐水配制的蛋白A对照品用样品稀释液稀释,吸光度大于空白值,但是回收率太低了。
请教高手啊,这么一个情况方法学验证做不下去了啊 ,我们的样品一般用生理盐水溶解
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feiliulei

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by feiyue122 at 2015-01-20 15:53:25
请问,你用的是什么方法啊!双抗体夹心法码,能不把标准曲线的数据说一些

是的,双抗夹心。
具体数据我明天截图给你看吧

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-01-20 20:13:17
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343680817

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试剂盒里面给了稀释液的,你为什么要用生理盐水呢?
2楼2014-10-28 22:19:07
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feiliulei

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 343680817 at 2014-10-28 22:19:07
试剂盒里面给了稀释液的,你为什么要用生理盐水呢?

如果待测样品浓度很低,稀释后低于检测限,那么检测结果的可信度在哪里?
如果样品浓度稍高,稀释多少倍检测结果才可信呢?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-28 23:17:11
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343680817

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by feiliulei at 2014-10-28 23:17:11
如果待测样品浓度很低,稀释后低于检测限,那么检测结果的可信度在哪里?
如果样品浓度稍高,稀释多少倍检测结果才可信呢?
...

试剂盒有它的灵敏度,尽量不要稀释到低于检测限;如果确实低于检测限了那就是低于了,那样品中Protein A含量应该很少了。
高浓度样品的稀释倍数可以自己去做方法学验证。
4楼2014-10-29 21:06:07
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