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liuyunmeng_007

[交流] 蛋白质纯化

由芽孢杆菌提出的葡聚糖蛋白质，等电点为3.8，求助是过阴离子交换柱还是阳离子交换柱，用什么缓冲液，浓度和pH应该配多少，如果过4FF疏水柱应该用什么缓冲液，浓度和pH应该为多少？知道的请帮助一下，很急谢谢拉
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1楼 2008-04-14 08:12:53
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
从等电点看是过阴离子交换柱好，但是过阴离子交换柱还是阳离子交换柱，要看你的目标蛋白葡聚糖蛋白质在什么pH范围稳定，至于缓冲液和pH还是根据你选择的离子交换柱来决定。
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2楼2008-04-14 10:19:14
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11014612

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
用阴离子交换柱
至于缓冲液的PH
可以在试管中加入一些阴离子胶(你阴离子柱里面加的那种)和不同PH的缓冲液\
加入酶液过一段时间后测定上清的酶活
选酶活开始降低的PH+1作为缓冲液的PH
至于缓冲液的浓度如果蛋白浓度不大的话20mM就足够了
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3楼2008-04-14 11:27:41
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znqxmc

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
既然目的蛋白的PI 为3.8，当然用阴离子交换柱，楼上的说的很好~~：选酶活开始降低的PH+1作为缓冲液的PH ，当然如果分离效果不好，你可以多试几个pH条件，缓冲液可以选择pH 7.0 ,20mM 的 TEA-HCl 先试试效果~~
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慢慢看，慢慢学~~
4楼2008-04-14 19:11:38
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