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cmds1907

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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天空shm: 金币+30, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案, 太有用了，步骤说的很清晰 2014-08-21 08:53:56

现上传译文的后两段：
滴加一滴30% 过氧化氢后, 再次测量412 nm处的消光系数，并得出空白值。样品中自由巯基基团的浓度采用与半胱氨酸校准曲线来计算。总巯基基团按如下法确定：将0.5 mL牛奶与2.5 mL 0.05 M硼酸盐/0.01M EDTA，pH8.3/8.33 M尿素缓冲溶液和50 mL DTNB-试剂混合，取适量于1cm 池长的比色皿中。15分钟后，测量412纳米处的消光系数，并同上滴加一滴30% 过氧化氢后测量空白值。总巯基基团的浓度可采用与牛血清白蛋白的校准曲线来计算，在其三维结构中包含一个隐藏的巯基基团，在缓冲溶液中加入尿素可（使其）变性。
掩蔽（隐藏）的巯基基团(MSH)的浓度可如下计算：总巯基基团(TSH)的浓度减去自由巯基基团(FSH)的浓度。与蛋白质相结合的半胱氨酸的总浓度可如下法确定：在35 摄氏度1小时内，配制（培养）0.25 mL牛奶1.25mL 0.1M Tris-HCl/12 mM EDTA/0.6% SDS，pH7.6/8 M 尿素/10 Mm DTT缓冲溶液；随后，被还原的蛋白质和DTT在一个GPC（凝胶渗透）-色谱柱上以0.25 mL 混合液洗脱分离，使用75 mM Tris/10 mM EDTA/0.45% SDS，pH7.5/6 M尿素缓冲溶液。用1.25 mL缓冲溶液洗涤后，收集3mL洗脱液。收集的液体与0.1 mL 0.5 M Tris 缓冲溶液和50 mL DTNB 试剂混合。在加入DTNB 试剂15至90分钟后，测量412纳米处的消光系数。滴加一滴30% 过氧化氢后再次测量空白值。S-S桥的浓度可如下计算：从还原后巯基的浓度减去总巯基基团的浓度，然后除以2。

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4楼2014-08-20 18:10:23

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