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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] WB 已有1人参与

今天在做WB，把一个分子量很小的蛋白和一个分子量很大的蛋白放在一块胶上了，被别人说不能放一起，问了也没说为什么，请问各位会有什么样的影响，是会对转膜有影响么？谢谢谢~~~~
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1楼 2014-08-18 20:38:51
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这要看这两个蛋白到底差别有多大。如果一个十几KD的蛋白和300KD的蛋白同时在一块叫上跑胶、转膜，可能就有些问题：
1、胶浓度选择问题：大蛋白（如超过300KD者）需要低浓度的胶，而小蛋白（如11kd的蛋白）则最好在较高浓度的胶上跑。差别太大时二者不好协调（梯度胶也不合适）。
2、跑胶时间：其实与1是一类问题，大蛋白需要跑很长时间才进入胶中，而此时小蛋白可以都跑出去了。
3、转膜：很是这个问题，就是转膜的时间的控制问题，大蛋白需要较长时间可能都转的不完全，而很小的蛋白则有可能被转跑掉了（大蛋白时transfer buffer中甲醇浓度可以降低些）。

这是主要的问题。所以具体要看你的两种蛋白差别到底有多少，在一定范围内是可以同时做的（如一种蛋白在200kd一下，另一种在20kd左右等仍然可以同时做）。
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2楼2014-08-19 07:49:47
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我要睡觉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-19 07:49:47
这要看这两个蛋白到底差别有多大。如果一个十几KD的蛋白和300KD的蛋白同时在一块叫上跑胶、转膜，可能就有些问题：
1、胶浓度选择问题：大蛋白（如超过300KD者）需要低浓度的胶，而小蛋白（如11kd的蛋白）则最好在 ...

大蛋白是106KD，小蛋白是15KD  。今天结果出来了，小蛋白有表达，大蛋白没有显出来，不知道是蛋白纯化的问题，还是我跑胶的问题，明天再分开做一遍，呵呵~~谢谢你拉
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3楼2014-08-19 21:11:26
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 我要睡觉 at 2014-08-19 08:11:26
大蛋白是106KD，小蛋白是15KD  。今天结果出来了，小蛋白有表达，大蛋白没有显出来，不知道是蛋白纯化的问题，还是我跑胶的问题，明天再分开做一遍，呵呵~~谢谢你拉...

这两个在一起完全没问题的。106kd不算大。
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4楼2014-08-19 21:13:55
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我要睡觉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-19 21:13:55
这两个在一起完全没问题的。106kd不算大。...

嗯！那就不是我的问题啦啦啦啦~~~
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5楼2014-08-19 21:27:05
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