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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 帮忙看一下提的真菌RNA 跑的电泳 谢谢啦~~~
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
354929697(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:08
第一次提吧，先看一下RNA提取注意事项吧，多提几次就好了。
提得多了，熟练了，动作又规范又快就好了。
DNA污染，看看是否对你下步实验有影响。有的话加酶去掉就可以。
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11楼2014-08-15 14:31:44
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zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
354929697(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:22
估计是没有提纯，我之前做真菌经常出现拖带，分析原因是有蛋白质。建议，提取后的RNA做一下核酸蛋白分析，确定一下能否用。
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zengsihai
12楼2014-08-15 17:03:56
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
354929697(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:47
1，适当提高样品的量，如果提取之前样品总量很少，提出的RNA容易弥散
2，检查你所用的所有试剂，凡是自己配的试剂，DEPC水可能效果不好了，更换试试
3，加Trizol后，氯仿抽提两次试试，效果会好些；取上清时，少取，不要贪多，会减少DNA及蛋白污染

提取后，测浓度，如果按比例稀释，浓度成比例变化，那你提取的RNA基本是没有问题的
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13楼2014-08-15 21:35:11
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毅坚

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，本人是生工提取RNA的，不知道你的RNA后续是做什么精密实验。就我们公司而言，这样的RNA做荧光定量是没有问题的。注意提取过程中的一些小操作细节，如带口罩，吸液，取样均一等，润色一下应该可以达到你们工程师的要求吧。祝您顺利！
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14楼2014-08-17 09:30:27
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你提的是什么真菌，如果是酵母类的单细胞真菌，建议用液氮冻融几次，再用trizol破菌抽提，如果是植物类大型真菌或者是丝状真菌，那我建议你用液氮好好磨一下，你这个结果明显基因组dna太多了，这个会严重干扰的，没法往下做。你也可以试着用dna酶处理一下，但一定要是rna酶free的，否则你的rna就尸骨无存了。

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15楼2014-08-17 10:40:39
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fe123333

金虫 (小有名气)
我想问一下您跑的marker是多少的  rRNA的大小各是多少？谢谢
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16楼2014-10-23 10:37:00
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q小妮qzi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 354929697 at 2014-08-15 13:54:19
再顺便问一下~~   枪头和EP管买的无酶的好  还是自己用DEPC处理的好？    买的无酶的还用在高温灭菌一下吗？

都可以的 影响不大
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17楼2016-12-28 10:38:19
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p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1，从胶图看可能存在DNA污染，可以用DNA酶再处理一下，去基因组，之后过柱子纯化。
2，已经存在一些RNA降解，但是问题不是很严重，应该可以往下接着做
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18楼2016-12-28 14:01:31
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