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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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354929697(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:08
第一次提吧,先看一下RNA提取注意事项吧,多提几次就好了。
提得多了,熟练了,动作又规范又快就好了。
DNA污染,看看是否对你下步实验有影响。有的话加酶去掉就可以。
11楼2014-08-15 14:31:44
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zengsihai

木虫 (小有名气)

iloveemuch

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
354929697(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:22
估计是没有提纯,我之前做真菌经常出现拖带,分析原因是有蛋白质。建议,提取后的RNA做一下核酸蛋白分析,确定一下能否用。
zengsihai
12楼2014-08-15 17:03:56
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
354929697(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-16 12:47:47
1,适当提高样品的量,如果提取之前样品总量很少,提出的RNA容易弥散
2,检查你所用的所有试剂,凡是自己配的试剂,DEPC水可能效果不好了,更换试试
3,加Trizol后,氯仿抽提两次试试,效果会好些;取上清时,少取,不要贪多,会减少DNA及蛋白污染

提取后,测浓度,如果按比例稀释,浓度成比例变化,那你提取的RNA基本是没有问题的
13楼2014-08-15 21:35:11
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毅坚

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你好,本人是生工提取RNA的,不知道你的RNA后续是做什么精密实验。就我们公司而言,这样的RNA做荧光定量是没有问题的。注意提取过程中的一些小操作细节,如带口罩,吸液,取样均一等,润色一下应该可以达到你们工程师的要求吧。祝您顺利!
14楼2014-08-17 09:30:27
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你提的是什么真菌,如果是酵母类的单细胞真菌,建议用液氮冻融几次,再用trizol破菌抽提,如果是植物类大型真菌或者是丝状真菌,那我建议你用液氮好好磨一下,你这个结果明显基因组dna太多了,这个会严重干扰的,没法往下做。你也可以试着用dna酶处理一下,但一定要是rna酶free的,否则你的rna就尸骨无存了。

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-08-17 10:40:39
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fe123333

金虫 (小有名气)

我想问一下您跑的marker是多少的  rRNA的大小各是多少?谢谢
16楼2014-10-23 10:37:00
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q小妮qzi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 354929697 at 2014-08-15 13:54:19
再顺便问一下~~   枪头和EP管买的无酶的好  还是自己用DEPC处理的好?    买的无酶的还用在高温灭菌一下吗?

都可以的 影响不大
17楼2016-12-28 10:38:19
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p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1,从胶图看可能存在DNA污染,可以用DNA酶再处理一下,去基因组,之后过柱子纯化。
2,已经存在一些RNA降解,但是问题不是很严重,应该可以往下接着做
18楼2016-12-28 14:01:31
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