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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白在云母表面的吸附力强吗？
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酷恋花

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白在云母表面的吸附力强吗？已有1人参与

想用原子力对云母上的蛋白成像，可是涉及到除盐的问题，不知道云母对蛋白吸附能力如何，用清水清洗会不会把蛋白液洗掉了···已经卡了好久了，先给大神跪拜一个···
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蛋白质生物学实验经验 纳米生物学

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1楼2014-08-14 11:13:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
我8月底又要飞米国了，再评时做课题和教学工作，我一般不来小木虫，有时差和许多原因，这个假期回国也不光是度假，还有很多有关重大项目的中外合作和国内立项之类的工作，今天上午我还去参加了会议，你的帖子的答复是下午刚写完的。

我不认为：回答网友提出的问题对我自己是一种损失，只要不耽误我的正常的学习、工作和生活。很多问题，我也答不出来，但是我会去查阅和自学，这本身就是提高自己水平的过程。要是总是感觉自己什么都懂，那就没有继续提高自己的动力了。虽然有时候，我的脾气也很大，不过总体上我还是积极参加讨论，不仅可以帮助别人，也切实地提高了我自己。比如：因为回答你的这个问题。A.Cass and F.Ligler edit,Immobilized Biomolecules in Analysis—A Practical Approach,Oxford University Press,1999；J.M.Guisan edits, Immobilization of Enzyme and Cell,Humana Press,2006；P.C.Braga and D.Ricci, Atomic Force Microscopy, Huamana Press,2003, 三本书几乎在一周内从头看了一遍，有时就是在车上看的——我不用自己开车。当然一般也不是坐公交。至少我对于原子力显微镜有了初步的实验上的了解。而且大大加深了对于生物大分子固定化的实验方法的理解。得到一个附带效果：对于量子点（我的可以涉及到）和生物芯片也有了促进。
你的问题实际上让我有很多收获。
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19楼2014-08-23 23:01:56
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
酷恋花: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 感谢分享 2014-08-14 12:32:26
引号内的内容摘自：http://baike.sogou.com/v267613.htm
“云母属于铝硅酸盐矿物，具有连续层状硅氧四面体构造。分为三个亚类：白云母、黑云母和锂云母。白云母包括白云母及其亚种(绢云母)和较少见的钠云母；黑云母包括金云母、黑云母、铁黑云母和锰黑云母；锂云母是富含氧化锂的各种云母的细小鳞片。工业上尤其是电气工业中常用的是白云母和金云母。
白云母的化学式为KAl2〔AlSi3O10〕〔OH〕2，其中SiO2 45.2%、Al2O3 38.5%、K2O 11.8%、H2O 4.5%，此外，含少量Na、Ca、Mg、Ti、Cr、Mn、Fe和F等。
金云母的化学式为KMg3〔AlSi3O10〕〔F，OH〕2，其中K2O 7～10.3%、MgO为21.4～29.4%、Al2O3为10.8～17%、SiO2为38.7～45%、H2O为0.3～4.5%，含少量Fe、Ti、Mn、Na和F等。”
针对楼主的问题，对于云母的其他性质，我不太关心，我主要关心的是云母中哪些成分可以用于固定化蛋白质。白云母里含有SiO2 45.2%金云母里含SiO2为38.7～45%、H2O为0.3～4.5%，这是我比较有兴趣的。因为普通玻璃的成分主要是二氧化硅(SiO2，即石英，砂的主要成分)，而在玻璃上通过共价与非共价的吸附作用是可以将蛋白质固定在玻璃板上的，而且硅片上固定化蛋白质本身就是制备蛋白芯片的一种生产工艺。
所以云母对蛋白吸附能力是足够大的，而且有可以形成共价键的固定化蛋白质与硅片或者玻璃片（主要成分是SiO2，即石英，砂的主要成分)，用清水清洗不会把蛋白液洗掉了，能形成共价键怎么可能用水系的掉哪。
具体的反应机制和反应的protocols,我一时想不起来了。
你可以查一下：
Greg T. Hermanson，Bioconjugate Techniques，Elsevier Inc，2013，3rd edition
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6709686

你这个问题挺有意思，因为解决此问题的技术就是纳米生物学的一种关键技术，比如在生物芯片制备过程中必须要把各种生物大分子固定在无机物的介质上。我也去好好查查资料，再来回复你。
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2楼2014-08-14 12:01:16
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
此文我已经加入到了我在本月底发布在本版的“小木虫生物综合版与分子生物版冷点问题讨论——凌波丽 个人总结 第六季”的文章里，目前该文共有69231个字，A4纸98页，约含有70个问题的讨论。

我会在本月底以前回复楼主。因为过了本月底，我就飞米国了。再在小木虫论坛见到我，最快也是明年的春节前后。

楼主的问题问的挺有水平！欢迎继续讨论。
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3楼2014-08-14 12:12:16
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酷恋花

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-14 12:01:16
引号内的内容摘自：http://baike.sogou.com/v267613.htm
“云母属于铝硅酸盐矿物，具有连续层状硅氧四面体构造。分为三个亚类：白云母、黑云母和锂云母。白云母包括白云母及其亚种(绢云母)和较少见的钠云母；黑云母 ...

好专业啊～小木虫真是卧虎藏龙啊！那就是说我的蛋白滴到白云母上就能很好地吸附了呗？应该不至于直接形成共价键吧？总之，先把奖励给你……楼下如果也有好的回答我再追加悬赏～

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莫懈怠，时间不多了！
4楼2014-08-14 12:30:36
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
实验的具体流程还没有给楼主哪。。。，我月底前会再次答复。
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5楼2014-08-14 12:43:46
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酷恋花

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-14 12:43:46
实验的具体流程还没有给楼主哪。。。，我月底前会再次答复。

嗯嗯，那太好了。我先给奖励，到时候可以追加一朵小红花嘛，哈哈
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6楼2014-08-14 13:58:31
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dustpuppet

木虫 (正式写手)
当云母表面带有水的时候，由于杂质的关系，表面会带有微弱的负电。 所以，带正电的一类的蛋白是可以通过微弱的相互作用附着在云母表面 （不要买太高等级的云母，杂质少了）。 你看看你要研究的蛋白的PI是多少吧。 不是所有的蛋白都可以粘附。 还有就是清洗干燥是都要轻，静电相互作用力不是那么强，你会把蛋白都洗掉，然后就只剩一个光洁的云母表面了
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酷恋花
我只谈技术
7楼2014-08-15 11:03:13
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酷恋花

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by dustpuppet at 2014-08-15 11:03:13
当云母表面带有水的时候，由于杂质的关系，表面会带有微弱的负电。 所以，带正电的一类的蛋白是可以通过微弱的相互作用附着在云母表面 （不要买太高等级的云母，杂质少了）。 你看看你要研究的蛋白的PI是多少吧。 不 ...

你说的很有道理，非常感谢～送一朵小红花～我看的是微丝，表面带负电荷～看来基本吸附不上去啊～我被文献忽悠了～呜呜呜呜～

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8楼2014-08-15 14:49:19
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dustpuppet

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 酷恋花 at 2014-08-15 14:49:19
你说的很有道理，非常感谢～送一朵小红花～我看的是微丝，表面带负电荷～看来基本吸附不上去啊～我被文献忽悠了～呜呜呜呜～
...

考虑用二价离子做桥，或者用APTES做云母表面修饰，就可以做了啊。
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酷恋花
我只谈技术
9楼2014-08-15 19:28:39
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酷恋花

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9楼: Originally posted by dustpuppet at 2014-08-15 19:28:39
考虑用二价离子做桥，或者用APTES做云母表面修饰，就可以做了啊。...

二价离子作桥还会涉及到除盐水问题吧～我今天的样本就有比较多的盐结晶，而蛋白却没看到～我查一下你说的后者看行不行～感谢分享～

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10楼2014-08-15 21:52:37
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