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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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freshair33

[交流] 求助:连接表达载体后单酶切正确,双酶切不正确

连接表达载体后转入大肠杆菌bl21,然后抽提质粒,单酶切与预期符合,目的基因加PET22b共8000bp,但是用双酶切不正确,表现为:用我的上下游引物酶切位点切的结果和单酶切一样,只有一条8000的带,而另外选择两个酶切位点切出来又是正确的。真是奇怪哈
   更奇怪的是,实验室另外一个同学和我做的结果一摸一样。
  有人说是自己设计的酶切位点坏了,但是没理由两个人都坏啊!
  大家帮忙分析下!
  奖励金币10个
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0):thank u! 欢迎常来o(∩_∩)o...
会不会是俩载体自连?
你可以用PCR验证一下你的目的产物,如果是阳性,还不放心的话,测序。毕竟是做表达吧,祝试验顺利
3楼2008-04-11 17:33:38
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

★ ★
asr(金币+2,VIP+0):thank u! 欢迎常来o(∩_∩)o...
也没有介绍一下外源片段的大小阿

再者也没有介绍一下用的是哪两种酶,还有用的是什么Buffer

看你的介绍,看样子有一个位点没有被切开

是不是酶的问题?

或者正像你们所说,酶切位点出问题了
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
2楼2008-04-11 17:14:00
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yellow.

在pET里是要做表达吧,早晚都要测序的
测个序看看吧
4楼2008-04-14 09:44:39
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