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真菌几丁质含量测定的几点问题 已有1人参与
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大家好！我是新手，现在正在做关于真菌细胞壁几丁质含量测定方面的实验。方法主要是几丁质经浓碱条件下脱乙酰作用形成不容的氨基葡萄糖聚集体，再通过亚硝酸条件解聚和脱氨基形成葡糖胺，最后通过测定实验与对照（水和标准氨基葡萄糖）的吸光度来换算几丁质含量（主要参考文献Differential Effects of Inhibiting Chitin and 1,3--D-Glucan Synthesis in Ras and Calcineurin Mutants of Aspergillus fumigatus）。但是在操作过程中，我遇到了几点问题： 1. 在样品前处理中，需要对菌丝体进行冷冻干燥，取5mg进行实验，那么这里的冻干菌丝体是需要研磨成粉末吗？ 2. 实验中75%冰乙醇处理热浴的样品需要与KOH形成均一相，为什么我这里的液体不能形成均一相？ 3. 在对均一相的离心过程中，我的实验组的离心管中出现了大量白色固体（类似于凝结而成的），这是为什么？ 4. 离心的结果不能得到沉淀，是为什么？ 希望论坛的大神们帮帮看一下啊！ 鄙人这里不胜感激！  原理图.gif |
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