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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你有没有试过你的底物显示液,会不会与的封闭液产生交叉反应
如果没有的话,就是包被抗体与你的地位显示液,产生交叉
还有就是你的微孔板没有包被好(封闭不完全)导致酶标抗体结合到微孔上
11楼2015-01-22 17:26:44
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq:858200882

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-20 08:20:42
好吧~我以为40%是甘油浓度不是终浓度啊,希望活性不会受到影响...

抗体通常的保存就是50%甘油,好算又方便。可以长期保存,只要不冻化就不会影响。
本公司专业从事蛋白纯化,抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq:858200882
12楼2015-01-23 00:43:55
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huajiahu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有时抗体与抗体之间也会交叉反应的。
13楼2015-11-06 17:23:43
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

标记完的溶液里面肯定还会有没标记上的HRP分子,至于是否会有非特异性吸附,可以通过实验证明。拿几个板条直接封闭,封闭完加酶标抗体孵育,然后显色看看是否有本底。
另外,我做标记的时候,没有用硫酸钠沉淀,硼氢化钠还原以后直接PBS透析过夜,抗体和HRP的质量比我一直用的1:1,一般如果抗体比较好,做到十万倍稀释是没有问题的。
希望对你有帮助。
14楼2015-11-08 22:49:51
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1032680224

新虫 (初入文坛)

内容已删除
15楼2016-03-14 13:12:17
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-19 10:24:39
谢谢露珠!我已经标记好了,步骤稍微有点不一样,不过也都差不多。
我用饱和硫酸铵等体积沉淀纯化了两次,你纯化一次可能还有游离的HRP吧。我把第一次纯化的上清也拿来做滴定了,有轻微的显色,OD最大不到0.3,酶 ...

你要加等体积的纯甘油···
16楼2016-03-17 22:34:41
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可儿不苦

金虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by ayiyaya at 2016-03-17 22:34:41
你要加等体积的纯甘油···...

是的、、、但是50%的终浓度在-25℃还是冻住了。。。
幸福那一个美梦,是二人同行才有。
17楼2016-03-18 11:20:47
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xy656691

金虫 (正式写手)

现在做的怎么样了?
18楼2017-09-28 11:34:42
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