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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 夹心ELISA方法的建立及酶标单抗
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你有没有试过你的底物显示液，会不会与的封闭液产生交叉反应
如果没有的话，就是包被抗体与你的地位显示液，产生交叉
还有就是你的微孔板没有包被好（封闭不完全）导致酶标抗体结合到微孔上
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11楼2015-01-22 17:26:44
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-20 08:20:42
好吧~我以为40%是甘油浓度不是终浓度啊,希望活性不会受到影响...

抗体通常的保存就是50%甘油，好算又方便。可以长期保存，只要不冻化就不会影响。
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本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
12楼2015-01-23 00:43:55
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huajiahu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有时抗体与抗体之间也会交叉反应的。
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13楼2015-11-06 17:23:43
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

标记完的溶液里面肯定还会有没标记上的HRP分子，至于是否会有非特异性吸附，可以通过实验证明。拿几个板条直接封闭，封闭完加酶标抗体孵育，然后显色看看是否有本底。
另外，我做标记的时候，没有用硫酸钠沉淀，硼氢化钠还原以后直接PBS透析过夜，抗体和HRP的质量比我一直用的1:1，一般如果抗体比较好，做到十万倍稀释是没有问题的。
希望对你有帮助。
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14楼2015-11-08 22:49:51
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1032680224

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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15楼2016-03-14 13:12:17
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ayiyaya

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 可儿不苦 at 2014-11-19 10:24:39
谢谢露珠！我已经标记好了，步骤稍微有点不一样，不过也都差不多。
我用饱和硫酸铵等体积沉淀纯化了两次，你纯化一次可能还有游离的HRP吧。我把第一次纯化的上清也拿来做滴定了，有轻微的显色，OD最大不到0.3，酶 ...

你要加等体积的纯甘油···
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16楼2016-03-17 22:34:41
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可儿不苦

金虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by ayiyaya at 2016-03-17 22:34:41
你要加等体积的纯甘油···...

是的、、、但是50%的终浓度在-25℃还是冻住了。。。
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幸福那一个美梦，是二人同行才有。
17楼2016-03-18 11:20:47
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xy656691

金虫 (正式写手)
现在做的怎么样了？
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18楼2017-09-28 11:34:42
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