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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

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[求助] WB和elisa结果不一致已有3人参与

目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通过酵母分泌表达所得；以前是用大肠杆菌包涵体表达的，通过复性获得样品，该样品通过ELISA\WB检测，以IFN抗体检测的，均为阳性结果，且做抗病毒实验，其抗病毒活性也和市场销售的IFN在同一个数量级，但是不能达到我们的目标要求，所以选择真核酵母分泌表达，想获得IFN和另一个蛋白A的双重作用；

酵母表达的IFN融合蛋白通过ELISA检测是为阳性的，也是用IFN抗体的，我们是自己包板的；但是WB检测却总是阴性的，我们同时以以前原核表达的作为对照，对照每次WB的结果都很稳定是阳性的，但是酵母分泌表达的却很难做出阳性的，虽然也做出来1-2次，我现在由以下几点担心：
1.IFN从融合蛋白上脱落了；
2. IFN上有一个糖基化位点，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗体识别位点；
3.我是通过DAB显色的，是不是显色方式不正确；

请大家帮我讨论讨论，谢谢

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