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新虫 (初入文坛)

[交流] 关于质粒转染问题已有1人参与

现在在做去泛素化酶usp家族的实验，把USP转进293Tcell之后进行报告基因检测，发现所要结果是降低的，说明质粒是转进去了。
可是同样作转染实验，国标大之后收细胞之后做Wb，却没有条带。按道理应该是表达了的，为什么检测不到。求解。

1楼 2014-08-06 11:05:07

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至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

reporter assay是非常之敏感的。WB则需要一定表达量才可以检出，且与抗体质量有关。
你用plasmid的量如何？何种转染方法？多久收获细胞？如何裂解细胞？蛋白浓度几何？上样多少？内参照信号如何？
按理说，293T的转染效率极高，表达水平也好，应该没有问题。再看看

2楼2014-08-06 12:19:11

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