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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于用GE公司的HiTrap Heparin亲和柱
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thaibin

金虫 (正式写手)

[交流] 关于用GE公司的HiTrap Heparin亲和柱

最近用HiTrap Heparin 亲和柱来纯化 酵母胞外表达的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF), 洗脱液分别为，Binding buffer: 10 mM Tris-HCl,   
Elution buffer: 10 mM Tris-HCl, 2 M NaCl, 结果Elution buffer什么也没洗脱下来，电泳没有条带
在发酵液中是检测出有bFGF的条带的，请大家帮忙分析下原因。是洗脱液出现问题了吗？谢谢
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Dreamit!Beit!
1楼 2008-04-09 19:00:27
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thaibin

金虫 (正式写手)
heparin 与很多生长因子都能结合，请问其中的原理是什么？谢谢！
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Dreamit!Beit!
2楼2008-04-09 19:07:54
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★ ★
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因为这个柱子是heparin（肝素）亲和的柱材料添装的，根据肝素的生理作用，可以与很多活性调节小分子结合（其生理作用就是和很多活性调节分子结合抑制其作用），故其能和很多血浆蛋白、生长因子结合。同时肝素的聚阴离子特性，使其还具离子交换的作用，可用于结合多种核酸结合蛋白，如果你要更详细的信息（关于其具体原理）找个时间把一些文献干出来，发个帖子。
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For my life！
3楼2008-04-09 20:11:32
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匿名

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4楼2008-04-10 19:37:28
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thaibin

金虫 (正式写手)
谢谢两位
enclve:  我配的洗脱液，还真没有注意pH 这个问题，单纯是提高NaCl的浓度。下次我试试洗脱液配成pH 6 的 。目前的问题是柱子和bFGF的结合力太弱了。
上次的实验，我把上柱后没结合的液体给倒掉了，失策啊～～没有检查柱下的液体里是否含有bFGF，下次一定得注意这个教训了。
还有咨询一下，亲和层析有啥需要注意的事项？谢谢
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Dreamit!Beit!
5楼2008-04-13 19:59:56
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匿名

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6楼2008-04-13 23:23:19
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匿名

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7楼2008-04-13 23:27:30
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