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Aim: Sulfated polymannuroguluronate (SPMG), a candidate anti-AIDS drug, inhibited HIV replication and interfered with HIV entry into host T lymphocytes. SPMG has high binding affinity for the transactivating factor of the HIV-1 virus (Tat) via its basic domain. However, deletion or substitution of the basic domain affected, but did not completely eliminated Tat-SPMG interactions. Here, we sought to identify other SPMG binding sites in addition to the basic domain. Methods: The potential SPMG binding sites were determined using molecular simulation and a surface plasmon resonance (SPR) based competitive inhibition assay. The effect of SPMG on Tat induced adhesion was evaluated using a cell adhesion assay. Results: The KKR domain, a novel high-affinity heparin binding site, was identified, which consisted of a triad of Lys12, Lys41, and Arg78. The KKR domain, spatially enclosed SPMG binding site on Tat, functions as another binding domain for SPMG. Further functional evaluation demonstrated that SPMG inhibits Tat-mediated SLK cell adhesion by directly binding to the KKR region. Conclusion: The KKR domain is a novel high-affinity binding domain for SPMG. Our findings provide important new insights into the molecular mechanisms of SPMG and a potential therapeutic intervention for Tat-induced cell adhesion. |
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人参5代: 金币+50, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2014-08-05 19:34:27
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目的：硫酸多糖聚古罗糖脂（SPMG）作为一个抗艾滋的候选药物，可以抑制艾滋病毒的复制，并且干扰艾滋病毒进入主导的T淋巴细胞。SPMG可通过它的基本域对HIV-1病毒的抗原因子产生高度的亲和力。然而，虽然该基本域具有消耗性和替代性的影响，但却不会完全消除Tat-SPMG的相互作用。在此，除了该基本域以外，我们寻求识别另一个SPMG的亲和位点。 方法：我们将在竞争性抑制测定法的基础上，采用分子模拟及表面等离子体共振检测SPMG的潜在结合位点。并通过细胞黏附试验来评价SPMG在Tat上的诱导性黏附作用。 结果：一个新型的高亲和力肝素结合位点——KKR域，被识别了。它是由LYS12,LYS14及ARG78三者联合组成。KKR域是SPMG在Tat上一个空间封闭的结合位点，作用类似于另一个SPMG的结合域。进一步的功能性评价证明：SPMG抑制Tat介导的SLK细胞黏附作用与KKR区域有直接的关联。 结论：KKR域是SPMG的一个新型高亲和力结合域。我们的发现为SPMG的分子机制及Tat诱导的细胞黏附作用的潜在治疗性干预作用提供了重要的新视野。 |
2楼2014-08-05 19:23:32
