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求助：pCDNA3.1（+）在EPC细胞中能够表达吗？
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求助：pCDNA3.1（+）在EPC细胞中能够表达吗？ 各位前辈，本人刚刚开始做真核质粒，想构建DNA疫苗，使用的载体是pCDNA3.1（+）， 酶切位点为Nhe I 和Xho I，前面加了Kozak 序列 F：CG（保护性碱基）GCTAGC（Nhe I酶切位点）ACAATGG（Kozak序列）TCCCGAAGAACATCAAGGA（目的基因含信号肽） R: CC（保护性碱基）CTCGAG（Xho I酶切位点）TTA（终止子）ATGATGATGATGATGGTG（6*His tag)TGAATGCTGCTTTTTGG(目的基因） 转染的四五次EPC细胞，提取mRNA，能够检测到目的条带，但是WB不管是24h或36h收集上清培养基或者细胞都检测不到？求各位指点！ |
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