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jonsen

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助:pCDNA3.1(+)在EPC细胞中能够表达吗?

求助:pCDNA3.1(+)在EPC细胞中能够表达吗?

各位前辈,本人刚刚开始做真核质粒,想构建DNA疫苗,使用的载体是pCDNA3.1(+), 酶切位点为Nhe I 和Xho I,前面加了Kozak 序列
F:CG(保护性碱基)GCTAGC(Nhe I酶切位点)ACAATGG(Kozak序列)TCCCGAAGAACATCAAGGA(目的基因含信号肽)
R: CC(保护性碱基)CTCGAG(Xho I酶切位点)TTA(终止子)ATGATGATGATGATGGTG(6*His tag)TGAATGCTGCTTTTTGG(目的基因)
转染的四五次EPC细胞,提取mRNA,能够检测到目的条带,但是WB不管是24h或36h收集上清培养基或者细胞都检测不到?求各位指点!
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