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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)

[交流] 求助提质粒

我这几天转化的大肠杆菌TOP10 提质粒3次,摇的菌液达到28小时了,但是浓度始终不大,不浓稠,LB培养液比较清。提取的质粒电泳时,有时有极微弱的条带,更多时候什么也没有,实在不知道该怎么办? 各位大侠帮帮忙!
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lij2

金虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
是不是大肠杆菌没在对数生长期。振荡培养12-16小时就够了。
6楼2008-04-08 14:36:23
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
是不是你的LB培养基不是新配的啊?或是你在培养时未加菌株抗性的抗生素造成ti质粒丢失了啊?
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
2楼2008-04-08 10:05:36
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)

培养时,已经加菌株抗性的抗生素了。并且已经进行了PCR检测,结果有目的条带出现。把PCR时用的模板10微升加到25毫升新鲜LB中,37度,250RPM培养28小时后的结果还是菌液不很混浊。
     用上述菌液提取质粒,没有提到。是不是菌液不浓稠,就会影响质粒的提取呢?

     请教了!
3楼2008-04-08 13:33:39
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傻子

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):搂主还有问题,你在费心一下.
是什么质粒?低拷贝的质粒,可能浓度就是不高的,多提几管再浓缩。可以加200微升菌液到25毫升LB中,提高抗生素浓度再试试
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
4楼2008-04-08 13:43:31
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