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重组蛋白分离纯化 已有1人参与
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| 我的重组蛋白带有GST标签，第一次做纯化的时候很顺利的得到了目的蛋白，但是在做第二遍的时候加了2-巯基乙醇，蛋白是挂在柱子上了，但是又洗不下来了，增大GSH的浓度也不起作用，两次不同之处是：第一次做的时候破碎以及平衡洗脱缓冲液用的都是pbs，第二次做的时候破碎用的pbs+2-巯基乙醇，平衡液与破碎液一样，洗杂及洗脱液用的是50mM Tris-HCl，150mM NaCl，2mM DTT。我想问下2-巯基乙醇和DTT对GST柱子的洗脱有影响吗？哪位大侠知道这是什么原因？2-巯基乙醇和DTT使用的浓度范围是多少？谢谢啦 |
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2楼2014-07-31 11:10:46