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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助: 一个实验问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoxiaowuye

[交流] 求助: 一个实验问题

我的最终目的是表达蛋白,现在实验进度是DH5a转化成功,测序验证正确.下步实验计划不知正确吗?
       再做一次转化用BL21感受态,然后挑斑,送去测序,正确后就可以表达蛋白了呢?  
       多谢各位!
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1楼 2008-04-07 11:44:05
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long0553299

★ ★
johnsooh(金币+2,VIP+0):thx a lot
你的问题有点难理解,转化至DH5a成功的是cDNA,还是你的目的片段?
如果是cDNA,那么,你还要进行一次引物设计,获得你的表达的那一段,再插入表达载体中.
如果是已经插入表达载体了,说明你的表达载体构建已经成功,可以转化至宿主菌,经PCR和双酶鉴定阳性就可以了,不用再测序了.后面就是表达了
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2楼2008-04-07 14:06:28
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mklpumc

木虫 (小有名气)
★ ★
johnsooh(金币+2,VIP+0):thx a lot
我的理解是你要用ＢＬ２１来进行表达，那么既然已在DH5a转化成功,测序验证正确，那么可直接将质粒转化ＢＬ２１，然后挑斑，扩菌提质粒后进行酶切鉴定，如果目的条带位置正确，则可直接用转化的ＢＬ２１进行表达，不用再测序了．
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3楼2008-04-07 14:28:45
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s0ngxia085

金虫 (正式写手)
两种可能性都被楼上说了啊
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4楼2008-04-07 14:43:41
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wuhuifang909

金虫 (初入文坛)
向三楼的请教下，怎么把质粒转化BL21呢？我也在做这个，初学，克隆到T-载体上的目的片断双酶切之后于PET连接，但是一直不成功。
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5楼2008-04-08 10:35:09
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