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rsq2001银虫 (正式写手)
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[交流]
急: GST融合蛋白的表达及纯化
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表达载体: pGEX-4T-2 Host: BL21 诱导条件：25度， 0.1mM IPTG， 诱导8h， 诱前OD值0.8左右吧 目的蛋白分子量: 34 KD 我的目的基因里疏水性氨基酸含量很高, 我试过很多的诱导表达条件, 但是决大部分都是以包含体的形式表达.我的东西都在超声沉淀里了,真的是无语啊 请问有哪些方案可以提高GST融合蛋白的可溶性表达. 再就是, 表达出的GST融合蛋白有无活性并无关系, 我只需得到去除GST标签之后的多肽(氨基酸序列,分子量8000). 然后我想问的是: 假若就让它 包含体表达, 再经过低浓度变性剂洗涤, 高浓度变性剂溶解, 然后过GST亲和层析柱, 它还能挂到柱子上吗? 能被分离纯化出来吗? 若不行, 有什么更好 的方案?? 请诸位高手帮帮忙,拿拿注意, 在此万分感激!!!!!!!!! |
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