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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要犹豫，直接测序。反正测不出来不要钱。
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我不会！
11楼2014-07-24 09:23:22
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)
多跑几次试试，换换缓冲液，菌液检测有目的条带就可以直接测序了
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道之所在，虽千万人吾往矣！
12楼2014-07-24 16:13:58
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 人偶骑士 at 2014-07-24 16:13:58
多跑几次试试，换换缓冲液，菌液检测有目的条带就可以直接测序了

恩恩，7个样，测序了2个试试，
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踏实
13楼2014-07-24 22:26:15
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 胡亚梅 at 2014-07-23 21:42:32
不一定啊，有可能是酶切没有切好，可以直接测序，现在测序也不贵，我之前有测序真确，但是酶切死活切不下来的情况

恩恩，我试了，静等测序结果
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踏实
14楼2014-07-24 22:27:21
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杨仔

铁虫 (初入文坛)
建议测序，同时可以用目的基因扩增引物做一下菌液PCR
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15楼2014-07-25 15:30:46
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 杨仔 at 2014-07-25 15:30:46
建议测序，同时可以用目的基因扩增引物做一下菌液PCR

目的基因引物，很容易有杂带

[ 发自小木虫客户端 ]
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踏实
16楼2014-07-25 18:16:02
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杨仔

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-25 18:16:02
目的基因引物，很容易有杂带
...

基因组，cDNA做模板容易有杂带，抽的单克隆质粒不会有问题的
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17楼2014-08-06 12:19:21
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happydove

新虫 (小有名气)
通用引物PCR其实很不准，建议你用一头通用，一头特异引物，扩增看看。
送测序可以，问题是载体序列的话，也是要收费的。
如果做酶切，质粒浓度得有保证。也可以换酶切一下看看。
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18楼2014-08-06 15:46:02
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wszl666

银虫 (著名写手)
确保酶切没有问题的话，就没必要测序了
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基因敲除
19楼2014-08-07 11:04:05
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 15:46:02
通用引物PCR其实很不准，建议你用一头通用，一头特异引物，扩增看看。
送测序可以，问题是载体序列的话，也是要收费的。
如果做酶切，质粒浓度得有保证。也可以换酶切一下看看。

之前通用引物p出来的，测序基本没问题，现在表达载体，p出来有条带的，基本上测序都不正确
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踏实
20楼2014-10-31 19:47:19
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