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肝微粒体p450含量测定的遇到一些问题
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肝微粒体自己制备的，BCA法测蛋白含量16mg/ml，但是测定p450含量时发现450和490处基本没有吸收，420处吸收很大。分析是p450转化成p420了。可能是我制备的肝微粒体存在问题或者我测p450含量时操作出现问题。 想问:1.如果是制备的微粒体没有活性，那BCA法能测到p420吗？如果是微粒体制问题，有可能是什么操作不当引起的呢？我是全程冰上操作的？ 2. 用于测p450含量的微粒体是-80摄氏度冰箱里拿出来解冻再测的，请问这有影响吗？解冻是放在冰上解冻还是要37℃迅速解冻？ 3.p420是怎么产生的？ 4.测定p450含量需要全程冰上操作吗？包括通co那步？ 5.一般多少浓度的微粒体来测？该加多少连二亚硫酸钠？有具体量的关系吗？ 6.因为没有那个可以扫基线的那个仪器，所以就用的一个只可以放一个比色皿的分光光度计，我是先把加了连二亚硫酸钠的那个比色皿进去，测定450，490，420（为了看有没有转化成p420），扣空白，然后把通co的比色皿放进去，也是三个波长。这样是否正确？我不明白为什么在没加连二亚硫酸钠之前的两个比色皿也要先扫基线校正？我是否需要在前面补上这一步？ 暂时就这些，麻烦知道的师兄师姐解答了，我签到了三天终于可以问问题，简直要感动的哭晕在厕所了＠(￣-￣)＠ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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