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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么PCR检测结果会不同？
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Yakamoz325

银虫 (小有名气)

[交流] 为什么PCR检测结果会不同？

做96×2个样，25微升的体系，放在一起做的。
因为一次跑不完，分两次跑的。

电泳检测时，发现前面一次跑的不如第二次好，第二次的没有非特异性条带，第一次有。
不知道是怎么回事，希望大家赐教。谢谢了。
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您不认识我。
1楼 2008-04-03 19:56:25
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
检查一下是不是有污染了，做个清水对照看看
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2楼2008-04-04 08:39:32
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Yakamoz325

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2008-4-4 08:39:
检查一下是不是有污染了，做个清水对照看看

呵呵，谢谢你。有做对照，没有污染的。：）
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您不认识我。
3楼2008-04-04 13:22:57
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seahow

木虫 (著名写手)
请问两次间隔多长时间？
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4楼2008-04-04 14:34:00
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
有时候进样量多了,交叉污染吧
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5楼2008-04-04 17:36:35
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Yakamoz325

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by seahow at 2008-4-4 14:34:
请问两次间隔多长时间？

第一次PCR跑完第二次的就直接放到PCR仪了。基本上没什么间隔吧。
第一板的96个样在跑的时候第二板的样放在四度冰箱了，呵呵。

ps：我没法上传附件
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您不认识我。
6楼2008-04-04 18:27:31
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Yakamoz325

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2008-4-4 17:36:
有时候进样量多了,交叉污染吧

哦？我看不太懂，呵呵。
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您不认识我。
7楼2008-04-04 18:28:26
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lijack

金虫 (初入文坛)
遐想的：
1）会不会是没有混匀，造成局部引物浓度和模板太高所致，第二板有足够的时间混匀
2）毫无疑问，常温下更有利于引物准确的寻找模板匹配，第二板在常温下放置足够的时间足以使之准确配对，尤其是不使用热启动酶时，可能会有少量的延伸更有利于精确配对
3）两个板的阳性对照结果分别如何，请说明
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8楼2008-04-07 20:05:09
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fengyan

木虫 (小有名气)
下一次可以再把第一板的样品放置一段时间再跑试试看
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9楼2008-04-07 20:18:49
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