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求助关于用组氨酸纯化蛋白的问题
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| 最近在做镍柱纯化组氨酸标签融合蛋白。遇到的问题是得率太低，从蛋白胶的结果看来是由于蛋白质与镍柱结合的效率太低。我用的是qiagen公司的镍柱，使用1.5毫升的离心管纯化，请问各位大虾谁知道如何提高得率呢？谢谢啦！！！ |
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bijiaoyingyang
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5楼2008-04-09 17:03:15
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3楼2008-04-09 11:01:48
winter_gates
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reasonspare(金币+5,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
reasonspare(金币+5,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
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你的这句话是怎么得到的呢？目前除了食品行业，在其他的生物行业中，亲和层析被认为是最方便和快速有效的方法。除了反向层析，我做过几乎所有的层析方法和材料，最终结论就是亲和层析的得率、效率、速度、纯度都是很好的，一般都能满足要求，且镍柱的纯化方法多样，适用性也高，当然这是在对重组蛋白对蛋白本身火星没有影响的情况下的结论。镍柱对6*his标签的结合力我一直没有查到，但是用于纯化是绝对没有问题的。 楼主告诉我你的具体情况，并不能简单的说提高结合率的方法。 1、his-tag的位置，会不会被自身的蛋白结构所包埋。 2、his-tag的数量 3、缓冲液的配置、pH，洗脱条件等等。 给你们推荐一篇文献吧：Protein production and purification NATURE METHODS | VOL.5 NO.2 | FEBRUARY 2008 还不错。 |
4楼2008-04-09 16:31:31
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