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请教T cell hybridoma 的培养问题
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各位老师同学， 本人刚刚接触细胞培养，从合作者那里收到隔夜运送的T cell hybridoma,放在干冰中。细胞系是58alpha－beta－CD8alpha＋beta＋ cell line，用的medium是complete RPMI 1640 medium plus 0.1 mg/ml G418 and 2 mg/ml hygromycin.收到细胞后我直接在37度下解冻然后1ml细胞溶液先加入9ml的medium洗涤一次，吸去上清液后加入5ml medium然后放入37C，5%CO2 的incubator中，放入incubator之前我会用hemocytometer数一下细胞density，我发现细胞的形状成非常完美的球形，而且不能被trypan blue染色，但是培养两天之后观察细胞就全部能被trypan blue染色了，这说明细胞死了。但是在培养满一个星期之后细胞又都活过来了，数量很多且medium也变成黄色了，而且细胞不能被trypan blue 染色，但是奇怪的是细胞的形状不像最初的时候那么圆了，而且接下来做calcium flux发现激活用anti－CD3和anti－IgG激活不了calcium，用别的抗体检查表面TCR，CD8，CD3分子都在，请问是不是由于运输的时候细胞已经不太正常所以我做不出来calcium flux的现象呢？ 谢谢大家！ |
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