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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如果我要检测一个转录因子由于刺激而诱导性表达，刺激多长时间可以用western检测出来
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lmc2537

铜虫 (小有名气)

[交流] 如果我要检测一个转录因子由于刺激而诱导性表达，刺激多长时间可以用western检测出来

谢谢大家！
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1楼 2014-07-06 18:14:21
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72度冰

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lmc2537: 金币+2 2014-07-07 16:23:27
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-07 19:02:18
一般情况下，建议楼主是做一个时间梯度的，常见的也是最保险的：0，2,4,6,12,24h, 或者 0,4,8,16,24h  各种转录因子的活化时间也不是十分固定，看是哪个通路的，不过一般而已，2h左右就可以检测到，既然是刺激入核，在之后的一段时间直到24h左右应该都可以检测到，有些情况24h之后会回复到正常水平。
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吾非予苍生，乃为汝，魁于天下。
2楼2014-07-07 16:16:57
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 72度冰 at 2014-07-07 16:16:57
一般情况下，建议楼主是做一个时间梯度的，常见的也是最保险的：0，2,4,6,12,24h, 或者 0,4,8,16,24h  各种转录因子的活化时间也不是十分固定，看是哪个通路的，不过一般而已，2h左右就可以检测到，既然是刺激入核， ...

谢谢你的回答，我的问题不是刺激使转录因子入核，而是使转录因子的蛋白水平表达增加。
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3楼2014-07-07 16:23:19
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72度冰

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by lmc2537 at 2014-07-07 16:23:19
谢谢你的回答，我的问题不是刺激使转录因子入核，而是使转录因子的蛋白水平表达增加。...

一样的，我的意思是转录因子表达增高最后都会入核的，因为不入核的就不叫转录因子了…… 你可以先只做0,4,8h, WB检测应该就足够了。不过如果你的靶分子就是转录因子，例如你的目的分子可以使这个转录因子去泛素化从而表达增高，那么有必要多做一些时间点，如上贴中我所说的就很规范了。
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吾非予苍生，乃为汝，魁于天下。
4楼2014-07-07 16:27:46
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72度冰

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-07 19:02:35
lmc2537: 金币+3, 明白，谢谢！ 2014-07-08 11:33:23
如果你是为了做一种单纯性的特殊刺激，去检测一种转录因子诱导表达的情况，例如用LPS去刺激细胞，检测IRF3的表达情况，由于LPS的特殊性以及剂量依赖性，低剂量24h也能看到变化，高剂量16h左右就恢复了。但是不管是什么刺激，我个人建议，最好的效果还是做时间点，0,2,4,6,12,24h 去检测。
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吾非予苍生，乃为汝，魁于天下。
5楼2014-07-07 16:31:12
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