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woo_lipin

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于MTT

最近在做MTT实验检测药物对细胞的生长抑制作用
1.以4000-5000/孔细胞种板，贴壁后吸掉培养基，换用不同浓度梯度的药物处理72h；
2.培养终止前的4h加入5mg/mlMTT20ul
3.4h后小心吸弃上清，加入DMSO150ul，振荡后测OD值
（实验以0.1%DMSO为溶剂对照；只加培养基不加细胞的孔为空白对照）
测出的OD值范围在0-1.5，这样的值是否可信？
因为算出的抑制率不高，低于50%，挺怀疑这个结果，因为国外文献报道是有效的啊
请高手指点！

[ Last edited by woo_lipin on 2008-3-31 at 11:13 ]
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1楼 2008-03-31 09:57:20
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
每空5000个细胞就够了，其原则是对照组的细胞在实验结束时的OD值与活细胞数之间仍然处于线性范围（一般为OD值0.2——2.0之间）。
摘自徐叔云《药理实验方法学》
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3楼2008-04-01 22:29:54
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
你用多少体积的培养基养72h?少的话72h可能不够，影响细胞状态。而且72h时要确定对照组的细胞不要太挤，有可能挤死。我感觉最头疼的是MTT的线性范围很窄，导致你的抑制率不高，可以在显微镜下观察，大概有多少。我现在改用CCK-8试剂盒，贵了点，说明书上说线性范围要宽好多。
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2楼2008-03-31 17:57:54
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