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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE的问题
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bomeijuan

银虫 (小有名气)

[交流] DGGE的问题

做DGGE的时候,银染以后只有MARKER出现条带,其他样品都没有,难道是DNA降解了吗?
PCR产物放4度会使DNA降解吗?
做DGGE的时候对试剂要求是不是很高?配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺的时候有结晶,怎么促溶?
实验过程当中有什么需要注意的细节?
急求助,高手都来帮忙拉!
也期待与高手交流.QQ:157927707,E-MAIL:bomeijuan@yahoo.com.cn

[ Last edited by bomeijuan on 2008-3-30 at 15:32 ]
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1楼 2008-03-30 10:55:26
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shuhua759

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
银染以后只有marker没有别的条带也很正常，DGGE不是一次就能出结果，有时候即使你的PCR的结果非常好，也许可能什么也没有，所以你的也属于正常。
有结晶你可以用水浴加热一下，促进其溶解。
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2楼2008-03-30 19:45:12
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bomeijuan

银虫 (小有名气)
pcr产物需要纯化吗?
条带没有需要什么办法解决呢?
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3楼2008-03-30 22:02:01
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shuhua759

捐助贵宾 (著名写手)
PCR后如果没有杂带或者杂带的片段长度和目的片段长度相差比较大的话，也不需要纯化吧.
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4楼2008-04-01 19:43:30
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liuli2005cq

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
做DGGE的时候其实需要注意很多细节，染色没有出现条带，可以在点样之前，跑个琼脂糖电泳粗略看样品的有无及浓度，如果不够亮，可以将几次的pcr样品混合，然后再跑DGGE. 另外缓冲体系的浓度，我在实验中用的是0.25*TBE,效果很好，另外，温度，胶浓度是否合适等，都影响结果。
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5楼2008-04-01 20:33:21
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