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银河海盗

铁虫 (小有名气)

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[交流] 电泳缓冲系统

各位大侠你们好！
小弟是刚刚涉足生化的新手正在研究电泳，最近我在一本权威人士编著的电泳书籍中有一事不明，请各位大侠给予指点，小弟对此支持给与感谢。
具体疑问是基于聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质阳极电泳缓冲系统的考虑原则中的“尾随离子的选择”书中是这样写的“一般选择PKa值比分离胶缓冲系统高一个PH值的弱酸或氨基酸作为尾随离子。这样可以确保在电泳是有50%的弱酸分子荷电。因而它们的迁移率高于任何样品组分。”
小弟对画黄线处不明，并进行了化学，数学推导推导！推导如下：HAc代表弱酸分子；Ac-代表解离的弱酸离子；H+代表溶液的氢离子浓度。
溶液中存在电离平衡：
HAc= Ac-+ H+
Ka=[ Ac-][ H+]/[ HAc]
C HAc=[ Ac-]+[ HAc]
经推导[ Ac-]的分配系数ð[ Ac-]=Ka/（[ H+]+ Ka）
如果按上所述一般选择PKa值比分离胶缓冲系统高一个PH值的弱酸或氨基酸作为尾随离子。Ka应较[ H+]小一个数量级，经计算ð[ Ac-]不能达到50%，怎么可以确保在电泳是有50%的弱酸分子荷电呢! 请教是我推导有误，还是……….

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1楼 2008-03-30 10:23:24

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