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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR的重复性

大虾们好!前各阶段我已经初步摸索出了PCR的条件,PCR结果的条带亮度也可以,但有一些其它的杂带。但是最近重复时却怎么也重复不出来了,杂带也没有。我的做的是菌液PCR,用的是冷冻保藏的同一批菌体,请指点!
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ypan

木虫 (著名写手)

冷冻保藏的时候菌液里面加了甘油吗?浓度是多大?在什么条件下保存?
关于PCR有杂带的问题,可以用Touch Down PCR 来优化!
如果是阳性克隆菌的话,最好抽提出一部分质粒保存,另外还可以涂布平板与4度冰箱保存,再加上加甘油保存阳性克隆菌液,总共3种保存方式。这样可以做到万无一失!
嘿嘿,希望对你有用!
2楼2008-03-28 12:45:14
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

把菌重新涂板活化再做试试
3楼2008-03-28 18:46:07
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