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荧光双标,急需帮助!!!!!
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我对我分离的细胞进行爬片后,做荧光双标记,想定量的看一下分离的混杂的细胞中目标细胞的含量,但是标记的结果却让我百思不得其解. 我分离的是小鼠味蕾上皮细胞,用的双标一抗为兔的单科隆抗CK8 和兔的多科隆抗PLCB2,CK8 主要标记成熟与未成熟的味蕾细胞,而后者指标记成熟味蕾细胞中的二型细胞,所以结果应该CK8标记的多而后者少但结果刚好相反. 我的试验过程如下: 4%多聚甲醛固定爬片 4C 2h PBS冲洗3*5vmin 一抗孵育4C 6h(一抗溶解在含1%正常山羊血清,0.3% Triton X-100的PBS中) PBS冲洗3*5vmin Alexa 488-congjugated anti-mouse IgG 1.5h 4C PBS冲洗3*5vmin TR连接的donkey anti-rabbit IgG 1.5h 4C PBS冲洗3*5vmin,缓冲甘油封片,LCSM观察 请各为高人大侠看一下我的问题可能处在那里.谢谢. |
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