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zhaoddan

新虫 (初入文坛)

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[求助] 细菌致腐能力比较——生物膜测定方法中出现的问题求助

我有10株不同细菌，要通过生物膜形成能力比较其致腐能力。我知道方法是：将10株细菌过夜培养，1:1000稀释液加入96孔板培养24h，用结晶紫染色，用乙醇脱色，脱色液在570nm下用酶标仪测定OD值。我想问的是：
1.我需要测定这10株菌的生长曲线吗？因为我是将所有菌一起过夜培养，可是不同菌的对数期不同。可是这样很麻烦。
2.有的文献是控制初始浓度比如10^8 cfu/ml，我如何测定细菌的初始浓度啊，就是说如何将OD值与细菌的浓度成立线性关系？
3.在移去培养液这步时，要把96孔板底部的膜移去吗，另外有的菌顶部也是有一层膜的，是不是也要去除，只留吸附在壁上的细细的一条膜？因为如果一点膜没有吸掉的话OD值就会差很多的，大家的平行性好吗
4.用酶标仪测生物膜浓度需要控制OD值在0.2-0.8之间吗？因为有的细菌OD值很高的，如果1:10稀释的话很多都超过1甚至2, 1:1000稀释也有超过1的。我用的酶标仪型号是：SpectraMax M2
我是微生物菜鸟，请大家指教！！！谢谢~！

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