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细菌致腐能力比较——生物膜测定方法中出现的问题求助
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我有10株不同细菌,要通过生物膜形成能力比较其致腐能力。我知道方法是:将10株细菌过夜培养,1:1000稀释液加入96孔板培养24h,用结晶紫染色,用乙醇脱色,脱色液在570nm下用酶标仪测定OD值。我想问的是: 1.我需要测定这10株菌的生长曲线吗?因为我是将所有菌一起过夜培养,可是不同菌的对数期不同。可是这样很麻烦。 2.有的文献是控制初始浓度比如10^8 cfu/ml,我如何测定细菌的初始浓度啊,就是说如何将OD值与细菌的浓度成立线性关系? 3.在移去培养液这步时,要把96孔板底部的膜移去吗,另外有的菌顶部也是有一层膜的,是不是也要去除,只留吸附在壁上的细细的一条膜?因为如果一点膜没有吸掉的话OD值就会差很多的,大家的平行性好吗 4.用酶标仪测生物膜浓度需要控制OD值在0.2-0.8之间吗?因为有的细菌OD值很高的,如果1:10稀释的话很多都超过1甚至2, 1:1000稀释也有超过1的。我用的酶标仪型号是:SpectraMax M2 我是微生物菜鸟,请大家指教!!!谢谢~! |
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