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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教关于cDNA反转录的问题
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lovebaby

铜虫 (小有名气)

[交流] 求教关于cDNA反转录的问题

我用INTRIVOGEN 的TRIZOL 提取植物总RNA,RNA 质量挺好,跑电泳显示18S、28S两条带很清晰,也没有杂带,接着用M-MLV反转录酶做反转录，RNAinhibitor做抑制剂， 合成第一连后再用RNaseH DNA 聚合酶I合成CDNA 双链 ，用氯仿抽提一次，跑电泳显示并不是弥散的带  而是有两条类似与RNA 的主带，真搞不清楚是怎么回事了，请高手指教啊！
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1楼 2008-03-24 17:10:00
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
呵呵,估计因为18S和28S的RNA本身量多,因而反转的量也比较大,如果点样量大点会不会出现弥散的带啊.不过不清楚你要做什么,如果不是很高要求的话,我们只做反转得到第一链然后就直接用PCR拿自己的基因了.如果你要做一些筛选什么的,是不是应该提总的mRNA更为合适
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2楼2008-03-24 20:20:42
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lovebaby

铜虫 (小有名气)
恩 谢谢楼上  我想筛选差异表达基因, 是不是我减少反转录的摸版量会比较好一些呢?我的RNA 量与OLIGODT是2:1的关系. 我需要用CDNA双链进行酶切,以前有人做过是用总RNA 的,图片是弥散的带,可是我不知道他的具体方法是不是和我的一致
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3楼2008-03-26 09:19:24
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