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跪求大家来看我的融合细胞。我已经无能为力了 已有3人参与
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我做的是单抗，骨髓瘤sp2/0细胞与小鼠脾细胞融合后，3天后的照片，rpmi培养基＋HAT＋类胎牛血清（胎牛血清没货了），上面感觉漂浮着一些絮状物，又像是污染，我现在不知道要咋办了，已经好几次了！     这些都是同一张图片在不同倍数显微镜下的图片。跪求大神指点，万分感谢！！！！  2014-06-11 100514.jpg  2014-06-11 100517.jpg  2014-06-11 100522.jpg  2014-06-11 100628.jpg  2014-06-11 100630.jpg |
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4楼2014-06-11 16:26:57
生物小通
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我看不清楚细胞，有些脏东西很正常，我做杂交瘤的时候也这样，主要是一些脾脏碾磨下的一些小碎渣之类的，你培养一段时间看看，如果增多直接丢弃或者这个污染的孔加NaOH处理。 细菌污染不是这样子，是一些小小的黑色点点以比较快的速度在培养基里打转或者到处跑，你的不像。要算污染可能是霉菌，如果污染霉菌，整个培养基会非常浑浊，培养基里面看到絮状的东西，霉菌的话有菌丝，污染直接全部丢弃，否则整个培养箱全毁，因为有孢子飘。但是我感觉你的没问题，你的黑色的东西大，感觉是“实”的，应该是一些实质的组织之类的。当然存在一些你忽略的真正的细菌或者霉菌也难说。 至于支原体污染，这个实在没办法，我的sp2/0复苏之后肯定要过老鼠腹腔，至少一遍，过两三次之后会清除支原体，然后取出来再培养，状态会非常好，非常适合做融合。融合时最好加双抗，血清要好的最好了，但是也影响不大，我们用的是小牛血清（融合培养是20%），融合细胞需要滋养细胞。 |
10楼2014-06-11 21:54:29
逍潇
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yipan 
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【答案】应助回帖
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血清中加入支原体清除试剂，可以杀灭支原体污染，同时还具有广谱抗菌作用。不同于抗生素，对细胞没有任何毒害和依赖性，因为试剂本身为多肽，可以降解。可以试一下。 支原体是一种大小仅为0.2~0.3 μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 μm）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。多篇文献研究表明：当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。 吉锐生物根据自身的经验开发了MycoplasmaOUT™，用于解决因支原体污染而导致细胞污染或状态下降的问题，同时其对于见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。从而确保研究人员的研究结果真实、可信。 MycoplasmaOUTTM Treatment 1、 推荐稀释比例为1:1000，比如：10ul的Treatment加入到10ml的培养基中。 2、 弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入新鲜的含有Treatment的培养基，1天1次，连续处理3天。这一点非常重要，因为Treatment在培养基中会被缓慢降解。另外，也可以2天1次，连续处理5-6天。 3、 如果发现细胞对Treatment非常敏感，或者很明显的抑制细胞生长，建议1:2000稀释，1天1次，连续处理6天。如果细胞污染严重，推荐再适当延长处理时间。 4、 用Treatment处理时，建议保持细胞的密度在50-60%之间。 5、 处理完毕后，加入新鲜的培养基，或者MycoplasmaOUTTM Prevention预防支原体再次污染。 MycoplasmaOUT™ Prevention 1、 推荐稀释比例为1:1000，比如：10ul的Prevention加入到10ml的培养基中，用于预防支原体污染。 2、 建议根据细胞的周期不一样，每2-4天处理1次，长期处理，以预防支原体污染。 |
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5楼2014-06-11 20:10:13
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逍潇
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