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Look_2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得你应该做一个普通的pcr检验一下引物

[ 发自小木虫客户端 ]
Look
11楼2015-07-09 10:58:52
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by小宁

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-07-09 10:23:01
按照你提取出RNA后用多少DEPC水溶解的计算,可以适当增加溶解水用量,想要更精确一点的话可以再测个吸光度计算一下RNA浓度。你的内参Ct在9左右,目的基金30左右,说明你目的基因的表达量太低了,你考虑重新换内参引 ...

我18SrRNA GAPDH β-actin都试过了  筛了15对引物了  都不行  别人没有做过我这个物种的 所以找不到文献报道的  我还找了同科的(我的是单属单种)文献报道的  也不行。有一对内参引物 在对照组中Ct值在28 在处理组中Ct值在32 这个差的也太远了··· 是不是还要再筛引物啊?还是其他方面有什么问题呢?
12楼2015-07-09 12:22:18
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yfasmz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主,你这个问题解决了么?如果解决了能分享下方法么
我也碰到这个问题了,内参CT值很好,溶解曲线也相当好,但是目的基因的CT值测不到,而且溶解曲线杂乱无章,我准备增加cDNA浓度和增加循环都做一下,如果还不行,就应该是引物问题了
13楼2015-12-17 11:31:47
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97546105

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yfasmz at 2015-12-17 11:31:47
楼主,你这个问题解决了么?如果解决了能分享下方法么
我也碰到这个问题了,内参CT值很好,溶解曲线也相当好,但是目的基因的CT值测不到,而且溶解曲线杂乱无章,我准备增加cDNA浓度和增加循环都做一下,如果还不行 ...

你好,我的目的基因浓度的CT值也测不到,我的cDNA扩actin很正常,可能就是表达量太低了吧,有什么好的解决办法没?还有做定量我都已经用原液做了
14楼2016-01-22 20:04:40
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lamagie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 97546105 at 2016-01-22 20:04:40
你好,我的目的基因浓度的CT值也测不到,我的cDNA扩actin很正常,可能就是表达量太低了吧,有什么好的解决办法没?还有做定量我都已经用原液做了...

请问你的问题解决了吗?我现在也遇到这样的问题,如果解决了,麻烦请告知一下
15楼2016-01-26 19:14:12
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jam2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.提高模板浓度试试;
2.优化下反应体系或者程序。
16楼2016-01-26 19:53:37
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jam2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提高模板浓度,降低内参浓度,或者优化下反应体系
17楼2016-01-26 19:54:46
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木兰雪

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by lamagie at 2016-01-26 19:14:12
请问你的问题解决了吗?我现在也遇到这样的问题,如果解决了,麻烦请告知一下...

你们问题解决了没呀  ,我的内参跑的挺好的  但是设计的引物跑出来也是杂乱无章。都停在原地快两周了,如果解决了 麻烦也告诉我一下吧
18楼2016-11-14 09:02:10
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我也想学好pcr

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by jam2015 at 2016-01-26 19:54:46
提高模板浓度,降低内参浓度,或者优化下反应体系

你好!我想请问一下,目的基因和内参基因的引物浓度可以不同吗?(我是内参ct值小,目的基因正常)

发自小木虫Android客户端
19楼2017-06-03 22:01:04
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屋里亲故啊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 我也想学好pcr at 2017-06-03 22:01:04
你好!我想请问一下,目的基因和内参基因的引物浓度可以不同吗?(我是内参ct值小,目的基因正常)
...

我也是,我的内参18s ct值都在7左右,但是基因的ct值都大于35了。不知道怎么办

发自小木虫IOS客户端
20楼2017-12-19 23:08:07
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