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Look_2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得你应该做一个普通的pcr检验一下引物

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Look
11楼2015-07-09 10:58:52
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by小宁

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-07-09 10:23:01
按照你提取出RNA后用多少DEPC水溶解的计算，可以适当增加溶解水用量，想要更精确一点的话可以再测个吸光度计算一下RNA浓度。你的内参Ct在9左右，目的基金30左右，说明你目的基因的表达量太低了，你考虑重新换内参引 ...

我18SrRNA GAPDH β-actin都试过了  筛了15对引物了  都不行  别人没有做过我这个物种的 所以找不到文献报道的  我还找了同科的（我的是单属单种）文献报道的  也不行。有一对内参引物 在对照组中Ct值在28 在处理组中Ct值在32 这个差的也太远了··· 是不是还要再筛引物啊？还是其他方面有什么问题呢？
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12楼2015-07-09 12:22:18
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yfasmz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，你这个问题解决了么？如果解决了能分享下方法么
我也碰到这个问题了，内参CT值很好，溶解曲线也相当好，但是目的基因的CT值测不到，而且溶解曲线杂乱无章，我准备增加cDNA浓度和增加循环都做一下，如果还不行，就应该是引物问题了
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13楼2015-12-17 11:31:47
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97546105

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yfasmz at 2015-12-17 11:31:47
楼主，你这个问题解决了么？如果解决了能分享下方法么
我也碰到这个问题了，内参CT值很好，溶解曲线也相当好，但是目的基因的CT值测不到，而且溶解曲线杂乱无章，我准备增加cDNA浓度和增加循环都做一下，如果还不行 ...

你好，我的目的基因浓度的CT值也测不到，我的cDNA扩actin很正常，可能就是表达量太低了吧，有什么好的解决办法没？还有做定量我都已经用原液做了
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14楼2016-01-22 20:04:40
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lamagie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 97546105 at 2016-01-22 20:04:40
你好，我的目的基因浓度的CT值也测不到，我的cDNA扩actin很正常，可能就是表达量太低了吧，有什么好的解决办法没？还有做定量我都已经用原液做了...

请问你的问题解决了吗？我现在也遇到这样的问题，如果解决了，麻烦请告知一下
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15楼2016-01-26 19:14:12
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jam2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.提高模板浓度试试；
2.优化下反应体系或者程序。
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16楼2016-01-26 19:53:37
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jam2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提高模板浓度，降低内参浓度，或者优化下反应体系
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17楼2016-01-26 19:54:46
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木兰雪

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by lamagie at 2016-01-26 19:14:12
请问你的问题解决了吗？我现在也遇到这样的问题，如果解决了，麻烦请告知一下...

你们问题解决了没呀  ，我的内参跑的挺好的  但是设计的引物跑出来也是杂乱无章。都停在原地快两周了，如果解决了 麻烦也告诉我一下吧
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18楼2016-11-14 09:02:10
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我也想学好pcr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by jam2015 at 2016-01-26 19:54:46
提高模板浓度，降低内参浓度，或者优化下反应体系

你好！我想请问一下，目的基因和内参基因的引物浓度可以不同吗？（我是内参ct值小，目的基因正常）

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19楼2017-06-03 22:01:04
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屋里亲故啊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 我也想学好pcr at 2017-06-03 22:01:04
你好！我想请问一下，目的基因和内参基因的引物浓度可以不同吗？（我是内参ct值小，目的基因正常）
...

我也是，我的内参18s ct值都在7左右，但是基因的ct值都大于35了。不知道怎么办

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20楼2017-12-19 23:08:07
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