2楼: Originally posted by hailunl at 2014-06-08 19:11:00
有非特异性很正常，PCR不能说明问题。
例如，引物特异性不好，或者退火温度过低，延伸时间过长都会出现非特异性条带，
只要有目标条带就可以了。
如果你想再检测，建议提高退火温度，质粒为模板，退火温度高点没 ...

12楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-11 15:23:49
1.不可能转两圈，第一圈到引物那里就停下来了。就算没停下来也是多扩了引物端的几个碱基。
2.LZ你要扩400bp的产物，延伸时间肯定不会超过1min的，除非用的快速高保真那种酶，从速度上说也是不可能转圈的。
3.LZ你 ...

13楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2014-06-11 15:31:48
首先，关于前三个的，第一条有人指出是不可能的了，第二条，延伸时间30s每个循环，条件都是合适的，有两组是正常的400+bp，第三个，重复序列是一个老师提出的建议，他们也有出现过聚合物的情况，现在在做产物纯化， ...

14楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-11 16:47:25
1.如果考虑重复序列的话还是得关注你的基因，因为载体肯定是不会有那么多重复序列的。
2.这个6000的片段很影响你下面的实验吗？不影响的话为什么纠结在这里呢...

2楼: Originally posted by hailunl at 2014-06-08 19:11:00
有非特异性很正常，PCR不能说明问题。
例如，引物特异性不好，或者退火温度过低，延伸时间过长都会出现非特异性条带，
只要有目标条带就可以了。
如果你想再检测，建议提高退火温度，质粒为模板，退火温度高点没 ...