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ypan

木虫 (著名写手)

[交流] 蛋白浓缩

本人在过柱纯化收集蛋白的时候,由于粗心,没有分部收集,把所有的洗脱缓冲液都收集在一个管子里面,造成蛋白浓度非常小,SDS-PAGE检测条带非常非常弱(是目的条带,没有杂带)。本人现在想用透析的方法将收集液浓缩一下。没有十分的把握确定透析缓冲液的配比,恳请哪位蛋白纯化浓缩高手指点一下,给一个比较详细的实验方案?
本实验有PEG、甘油等实验材料.
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
ypan(金币+2,VIP+0):说的不是很具体,但是还是要谢谢你!
这个简单,没你想象的复杂,透析袋外面加点PEG,你只是要浓缩而已。或者干脆冷冻干燥。
2楼2008-03-22 14:43:53
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ypan

木虫 (著名写手)

PEG直接撒在透析袋外面还是?
3楼2008-03-22 14:47:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
ypan(金币+3,VIP+0):谢谢!已经搞定!
PEG直接撒在透析袋外面,浓缩速度很快的。
4楼2008-03-22 14:52:07
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ypan

木虫 (著名写手)

欢迎大家继续给出好的意见!
5楼2008-03-22 14:52:09
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mark32280667806

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
是的,放4度(防止蛋白质变性),直接在透析带外面加PEG20000,等到了你需要浓缩的体积后,直接吸取就可以了
6楼2008-03-23 15:42:38
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11014612

银虫 (初入文坛)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
PEG可能对后面的SDS-PAGE有影响
有条件的话还是冷冻干燥比较好
7楼2008-04-05 19:15:12
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bsksln

银虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
peg是有些影响,最好的办法是用G200的干胶,吸水率极高,撒一些在透析袋上即可。一般蛋白浓缩就用超滤,peg,g200,冷冻干燥这几种方法。个人认为g200安全,方便
分子细胞
8楼2008-04-06 16:30:25
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
透析袋?早就没人用了,好的实验室有专门的蛋白质纯化仪器,简单的有Millipore柱,也不是很贵,只需要有冷冻离心机,半个小时即可。咨询当地仪器共应商。
9楼2008-04-06 19:59:44
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