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zf851

金虫 (小有名气)

[交流] 紧急求助:劳驾色谱高手进来看看,关于ATP ADP AMP的问题

花了老板两千多块钱
买了SIGMA公司三个标准品 准备做HPLC

SIGMA公司

Adenosine 5`-diphosphate Agarose ( ADP )       货号 A2810       规格:1ml

Catalog Number A2810
Matrix cross-linked 4% beaded agarose
Mtx activatn: cyanogen bromide
Mtx atchmt: C-8
Mtx spacer: 9 atoms



Adenosine 5`-monophosphate Agarose ( AMP )       货号3019    规格:1ml

lyophilized powder, Contains lactose stabilizers that must be removed prior to use.   
MDL number MFCD00801331
Descriptions

Physical form  Lyophilized powder stabilized with lactose

Legal Information  Sepharose is a registered trademark of GE Healthcare.

Properties

form lyophilized powder

extent of labeling 2-10 μmol per mL

matrix cross-linked 4% beaded agarose

matrix activation cyanogen bromide

matrix attachment N-6

matrix spacer 8 atoms

storage temp. −20°C
Safety

WGK Germany 3
Related Categories

... Affinity Chromatography > Nucleotide/Coenzyme Resins


Adenosine 5`-triphosphate Agarose ( ATP )       货号 A2767       规格:1ml
Descriptions

Physical form  Lyophilized powder stabilized with lactose

Legal Information  Sepharose is a registered trademark of GE Healthcare.

Properties

form lyophilized powder

extent of labeling 1-5 μmol per mL

matrix cross-linked 4% beaded agarose

matrix activation cyanogen bromide

matrix attachment C-8

matrix spacer 9 atoms

storage temp. −20°C
Safety

WGK Germany 3
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后来发现 这个药品不能以水溶解 标签上说明是将药品以水或缓冲液溶解后过微孔滤膜  我们照做了 将它处理以后进液相色谱 可好像没有发现一个像样的峰出来 出来的峰都很小 觉得像杂质 而非我们想要的东西

后来一查资料发现 那个东西 是亲和色谱制备的
有没有哪位高手能指点一二啊 亲和色谱是怎么回事儿?这个药品该怎么用呢?能不能用在HPLC上呢?
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xd_zidiao

银虫 (小有名气)

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可以用HPLC
流动相要注意PH值,否则药品会失活或在柱子上出不来。
你可以加大流动相的洗脱能力试试。
3楼2008-03-20 12:48:15
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xd_zidiao

银虫 (小有名气)

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亲和色谱作为HPLC的一个分支,主要对天然生物活性物质进行分离和纯化的。
我问楼上你的色谱柱固定相是什么,色谱柱选择有无问题?你的流动相PH值?
洗脱条件?以上几项是否符合亲和色谱的要求。
2楼2008-03-20 12:44:17
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zf851

金虫 (小有名气)

还有补充问题 能否劳驾解答 谢谢了

我的条件如下:
20%甲醇+80%缓冲液(0.06M磷酸二氢钠+0.04M磷酸氢二钠 PH=7.0)
C-18 250mm×4.6微米
PDA检测器  流速:1ml/min

乙腈我也试过了 可是还是不行
文献中方法是梯度洗脱的

时间          流动相A(缓冲液)             流动相B(乙腈)        流速
0                            100                                  0                     1.7
2                              95                                 5                      1.6
4                              75                                  25                    2.0
6                              70                                    30                 2.0
                  
我问的问题 意思就是说 标品是采用亲和色谱制备的 其硅胶不溶水中 但其中的成分是否会溶解出来呢?
或者说  我的洗脱条件 理论上是否可以把成分洗脱下来呢
因为 我事先并没有采用100%缓冲液洗脱 因为怕把柱子弄坏了
能否劳驾兄台 解惑?
万分感谢了
4楼2008-03-20 14:13:21
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xd_zidiao

银虫 (小有名气)

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你的样品用你第三步流动相溶解再过滤试试,看情况如何?
5楼2008-03-20 14:42:18
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