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夏日的风情

新虫 (正式写手)

[求助] 凝胶色谱 已有1人参与

各位大神好，小弟刚进实验室，菜鸟一枚，做的是多糖分理纯化，现要装凝胶柱，柱子是2.5*120cm的，大概需要多少葡聚糖G-200啊，我查了一下G-200的参数，如下面的图片，是不是用柱子的体积除以它的膨胀体积就好了，还是要用其他别的参数计算，很是困惑。还有就是要配成多大浓度的凝胶溶液装柱才合适。请大侠们给点建议，感谢高手们指教了，小弟不胜感激！

凝胶色谱
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1楼 2014-05-28 20:27:45
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夏日的风情

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 轩辕义 at 2014-05-29 09:52:37
关于这个计算，应该是与你的分离物质有关的。至于装多少凝胶，可以试验一下。凝胶柱层析主要是根据分子量大小来分离组分的，所以柱子装得好坏，和流速恒定很关键，分步收集量也要恒定和适量。

我做的是多糖，先过了DEAE离子交换，分中性糖和酸酸性糖，再过凝胶，分子量的话，大概在十几到三十KDa之间，我选择什么样的凝胶柱呢，还有就是葡聚糖G-200的膨胀系数是多大啊
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3楼2014-05-29 10:31:14
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轩辕义

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
关于这个计算，应该是与你的分离物质有关的。至于装多少凝胶，可以试验一下。凝胶柱层析主要是根据分子量大小来分离组分的，所以柱子装得好坏，和流速恒定很关键，分步收集量也要恒定和适量。
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2楼2014-05-29 09:52:37
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uranuser

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏日的风情 at 2014-05-29 10:31:14
我做的是多糖，先过了DEAE离子交换，分中性糖和酸酸性糖，再过凝胶，分子量的话，大概在十几到三十KDa之间，我选择什么样的凝胶柱呢，还有就是葡聚糖G-200的膨胀系数是多大啊...

根据你的分子量和你上面的那个表，应该选择G-100。
G-200的膨胀系数你表中数据有：膨胀体积30-40 ml/g。你不用太纠结于膨胀体积和柱子的体积，多处理些葡聚糖装柱后剩余些也没什么吧——要关注重点，这些枝节末梢不用太在意。你若是实在想计算，按照你开始说的，柱体积除以膨胀体积计算需要的葡萄糖的量也可以。
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4楼2014-05-29 12:00:44
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