应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重金求助啊！谁能给俺设计几个引物，并预测一下反应条件？
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 2327  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小love肖

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by dswjhs at 2014-05-21 09:21:05
1222-2676
多谢恩人搭救！...

你是想用AgeI/EcoRI 双酶切扩增出来的1222-2676段基因吗？这段序列中有2个AgeI位点
赞一下 回复此楼
11楼2014-05-21 09:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
12楼2014-05-21 09:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小love肖

铜虫 (初入文坛)
1222..2676
>AA
MSKKVFLNILILLSIFQLSAQNGNTADLKVLLDGVVIIRSDTFSEKEDQDNYSEKSILRDAGTGMIISGNRILTNAHVVSNSSYLKVKHFNSSKFYKAEVQYLGFDCDLAILKVEEDEFFSGVEPLEISEVSPALGSNLLILGYPGGDENITLENGNVSRVERVRYSFSGLDYRKAIRVNANIIPGYSGGPAIQNGRVVGITFQVSQSQGNVAYLIPPEIINHFLKDVEDGTYHGFPFPGFSFQNGHSSSLKSYLKIPEGLNGILINTIYPDSSFSDLLQPEDFVYKIDNSYLDGDGGIMDEIGGFIGDLIEEKFIGDHIKLFFYRNGKNYKVEGTLKRVPTLDIYRQQNKSSSFLSGGFLFQPVNRALAGGDSKRLESSLRYHYSYYIQDELYRFTDRDILLSGIYPDPLNSKYASYRYKILESINDRTPSDLEDFKSLWKKFYGGTISLKFRGVNLPIILDQDTIDKINIRIKKRFDVEADE
>HTRA1
ATGAGTAAAAAAGTATTTTTAAATATTCTAATTTTATTATCTATCTTTCAACTCTCCGCACAAAACGGCAATACTGCGGATCTAAAAGTTCTACTGGACGGTGTGGTCATCATTCGAAGCGATACTTTTTCAGAAAAAGAAGATCAAGATAACTATTCCGAAAAATCAATTTTACGGGACGCTGGTACCGGTATGATCATTTCCGGAAATAGGATTCTTACAAACGCACACGTTGTTTCCAATTCCAGTTATCTCAAAGTAAAACATTTCAATTCTAGTAAATTTTATAAGGCGGAAGTTCAATACCTAGGGTTTGACTGTGATCTTGCAATTCTCAAAGTGGAAGAAGATGAGTTTTTTAGCGGTGTAGAACCTCTGGAAATTTCGGAAGTTTCCCCCGCCCTTGGAAGTAATCTTTTGATTTTAGGTTATCCCGGAGGAGACGAGAACATTACATTAGAAAATGGGAATGTTTCTAGAGTGGAAAGAGTTCGTTATTCCTTTAGCGGTTTAGATTATAGAAAAGCGATCCGTGTCAATGCAAACATCATTCCGGGTTATTCCGGCGGACCGGCCATTCAAAACGGTAGAGTGGTGGGAATTACATTTCAAGTCAGTCAGTCTCAAGGAAACGTAGCCTACTTGATTCCTCCAGAAATTATCAATCACTTCTTAAAAGATGTTGAAGACGGAACCTATCACGGTTTTCCGTTTCCCGGTTTTAGTTTTCAAAACGGTCATTCTTCTTCTTTAAAATCCTATCTTAAAATTCCAGAAGGTCTAAACGGTATTTTGATCAATACGATCTATCCTGATTCTTCTTTTTCAGATCTTTTACAACCGGAAGATTTCGTTTATAAAATTGATAATTCTTATTTAGACGGAGACGGCGGAATTATGGATGAAATAGGAGGTTTTATAGGAGATCTGATCGAAGAAAAATTTATCGGTGACCATATTAAACTTTTCTTTTATAGAAATGGAAAAAACTACAAAGTAGAAGGAACTCTCAAACGCGTTCCTACGTTGGATATTTATAGACAACAAAATAAAAGTTCCAGTTTTTTATCGGGTGGTTTTTTGTTTCAGCCGGTCAATCGAGCACTCGCTGGAGGAGATTCTAAACGTTTGGAAAGTTCTCTTAGATATCATTACAGTTATTATATTCAAGATGAGTTATATCGTTTTACGGACAGAGACATTTTACTTTCGGGTATTTATCCAGATCCGCTTAACTCTAAATATGCGAGTTATCGTTATAAAATTTTAGAATCTATCAACGATCGTACTCCTTCTGATTTGGAAGATTTTAAATCCTTATGGAAAAAATTTTACGGCGGTACGATCAGTTTAAAATTCAGAGGTGTAAACCTTCCTATTATTTTAGATCAAGATACGATCGATAAAATCAATATTCGTATTAAAAAACGCTTCGACGTGGAGGCGGACGAATGA

AgeI/EcoRI 双酶切
引物：
F1   5‘-3’ ATGAGTAAAAAAGTATTTTTAAATATTC      Tm=46.5
R    5‘-3’ GCGAATTCATTCGTCCGCCTCCACGTCGAAG  Tm=75.1
F2   5‘-3’ CGCACCGGTGCCGCCACCATGAGTAAAAAAG  Tm=75.2
先用F1与R从cDNA中扩增，可以55°试试，33个循环，扩不出来可以再降低点温度试试，如果能扩出来，就再用F2与R再扩一次，目的是添加前面的酶切位点，你可以换成别的酶切位点，序列中有一个AgeI位点，55° 25个循环就行，你先试试吧，没办法F1引物的GC含量太低了
赞一下 回复此楼
13楼2014-05-21 10:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
14楼2014-05-21 10:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
15楼2014-05-21 10:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小love肖

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by dswjhs at 2014-05-21 10:20:34
这样的话就没办法用这个AgeI酶了吗？...

不能，那样酶切的话原始序列就不完整了，而且这个酶应该很贵，你可以换别的酶啊，一般载体都有的，HindIII就挺好，我经常用。
赞一下 回复此楼
16楼2014-05-21 15:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
17楼2014-05-21 16:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
18楼2014-05-21 16:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kernim

金虫 (正式写手)
引物设计也是我最头痛的事！不过还是要自己学会啊~
赞一下 回复此楼
19楼2014-05-22 20:48:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dswjhs

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
20楼2014-05-22 23:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dswjhs 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 化学专业申博 +3 赵子羊 2026-05-23 4/200 2026-05-24 18:10 by 工大学长
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 1rx34o113h 2026-05-23 3/150 2026-05-24 17:41 by 0i3mu4vkjz
[基金申请] 评审有感 +16 popular289 2026-05-18 27/1350 2026-05-24 17:34 by hhs666
[教师之家] 论文撤稿了 +4 bjvtcliu 2026-05-24 7/350 2026-05-24 17:29 by bjvtcliu
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 17:10 by 75ui6h7z2t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 17:01 by 75ui6h7z2t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 a2tycdlnq1 2026-05-23 5/250 2026-05-24 16:21 by hhx1yx9evi
[基金申请] 河北省自然科学基金 +6 Peterchao 2026-05-18 9/450 2026-05-24 16:02 by 130067131
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 pmo95bazuy 2026-05-23 8/400 2026-05-24 15:56 by 1uy1ht2y9r
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助，期刊 +4 希冀，有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀，有书读
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭