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dswjhs

禁虫 (职业作家)
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1楼2014-05-20 13:25:05
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小love肖

铜虫 (初入文坛)
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AgeI/EcoRI 双酶切
引物：
F1   5‘-3’ ATGAGTAAAAAAGTATTTTTAAATATTC      Tm=46.5
R    5‘-3’ GCGAATTCATTCGTCCGCCTCCACGTCGAAG  Tm=75.1
F2   5‘-3’ CGCACCGGTGCCGCCACCATGAGTAAAAAAG  Tm=75.2
先用F1与R从cDNA中扩增，可以55°试试，33个循环，扩不出来可以再降低点温度试试，如果能扩出来，就再用F2与R再扩一次，目的是添加前面的酶切位点，你可以换成别的酶切位点，序列中有一个AgeI位点，55° 25个循环就行，你先试试吧，没办法F1引物的GC含量太低了
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13楼2014-05-21 10:15:47
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dswjhs

禁虫 (职业作家)
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2楼2014-05-20 15:21:23
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love_st

金虫 (著名写手)
估计也没有人帮你吃饭的
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-20 15:32:14
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dswjhs

禁虫 (职业作家)
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4楼2014-05-20 16:01:32
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