北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sunnybomb

金虫 (小有名气)

[交流] 请教重组蛋白纯化问题

His-tag 重组蛋白 用Ni-His层析柱纯化不了,Elute缓冲液中目的条带不明显,且有杂条带。谢谢!本人是这方面的菜鸟,请指教

[ Last edited by sunnybomb on 2008-3-15 at 15:24 ]
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biocore

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
可以从以下几步分析原因。
1.含his-tag的重组蛋白,挂住后,流出的液体,去跑个带,如果有很强的目的条带,说明,树脂不行了,没有挂住。更换新的树脂。
2.elute条带不明显,那么加大咪唑的浓度。再看看。
3.有杂带,很有可能,树脂已经失活,有非特异性吸附。

建议更换,树脂。
2楼2008-03-15 13:45:43
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sunnybomb

金虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
我的层析柱是新的,刚用了两次,第一次和第二次出现情况一样。挂住后流出的液体有明显的目的条带,但用Elute洗脱后的溶液有其它小条带,都比目的蛋白分子量要小,会不会是在elute中蛋白不稳定水解掉了。谢谢!
3楼2008-03-15 15:22:33
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biocore


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
引用回帖:
Originally posted by sunnybomb at 2008-3-15 15:22:
我的层析柱是新的,刚用了两次,第一次和第二次出现情况一样。挂住后流出的液体有明显的目的条带,但用Elute洗脱后的溶液有其它小条带,都比目的蛋白分子量要小,会不会是在elute中蛋白不稳定水解掉了。谢谢!

从你挂柱后流出的液体有明显的目的条带看,就是his没有挂上去。
买硫酸Ni,来重新装配一下柱子。Ni流式了。所以挂不住蛋白。
加以买原装的。嘿嘿
4楼2008-03-15 20:50:36
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sunnybomb

金虫 (小有名气)

谢谢指教!我重新试一下
5楼2008-03-16 20:37:07
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biocore

引用回帖:
Originally posted by sunnybomb at 2008-3-16 20:37:
谢谢指教!我重新试一下

,当然最不幸的情况,就是你的蛋白空间位阻比较大,his没有和Ni结合上。
这样,就要换纯化方法了
6楼2008-03-16 23:17:35
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