应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教重组蛋白纯化问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 375  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

sunnybomb

金虫 (小有名气)

[交流] 请教重组蛋白纯化问题

His-tag 重组蛋白 用Ni-His层析柱纯化不了，Elute缓冲液中目的条带不明显，且有杂条带。谢谢！本人是这方面的菜鸟，请指教

[ Last edited by sunnybomb on 2008-3-15 at 15:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-03-15 11:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocore

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
可以从以下几步分析原因。
1.含his-tag的重组蛋白，挂住后，流出的液体，去跑个带，如果有很强的目的条带，说明，树脂不行了，没有挂住。更换新的树脂。
2.elute条带不明显，那么加大咪唑的浓度。再看看。
3.有杂带，很有可能，树脂已经失活，有非特异性吸附。

建议更换，树脂。
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-03-15 13:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnybomb

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
我的层析柱是新的，刚用了两次，第一次和第二次出现情况一样。挂住后流出的液体有明显的目的条带，但用Elute洗脱后的溶液有其它小条带，都比目的蛋白分子量要小，会不会是在elute中蛋白不稳定水解掉了。谢谢！
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-03-15 15:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocore

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
引用回帖:
Originally posted by sunnybomb at 2008-3-15 15:22:
我的层析柱是新的，刚用了两次，第一次和第二次出现情况一样。挂住后流出的液体有明显的目的条带，但用Elute洗脱后的溶液有其它小条带，都比目的蛋白分子量要小，会不会是在elute中蛋白不稳定水解掉了。谢谢！

从你挂柱后流出的液体有明显的目的条带看，就是his没有挂上去。
买硫酸Ni，来重新装配一下柱子。Ni流式了。所以挂不住蛋白。
加以买原装的。嘿嘿
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-03-15 20:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnybomb

金虫 (小有名气)
谢谢指教！我重新试一下
赞一下 回复此楼
5楼2008-03-16 20:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocore

引用回帖:
Originally posted by sunnybomb at 2008-3-16 20:37:
谢谢指教！我重新试一下

,当然最不幸的情况，就是你的蛋白空间位阻比较大，his没有和Ni结合上。
这样，就要换纯化方法了
赞一下 回复此楼
6楼2008-03-16 23:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunnybomb 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +10 芋泥小铃铛 2026-03-28 10/500 2026-03-29 20:51 by 无际的草原
[考研] 307求调剂 +9 超级伊昂大王 2026-03-24 10/500 2026-03-29 20:26 by 永字号
[考研] 求调剂 +4 青春裁为三截 2026-03-29 4/200 2026-03-29 15:01 by 唐沐儿
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 322求调剂 +5 旧吢 2026-03-24 5/250 2026-03-28 13:26 by Iveryant
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 考研调剂 +10 呼呼？~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭