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肉鸡大肠埃希氏菌耐药性的监测与分析
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肉鸡大肠埃希氏菌耐药性的监测与分析 【关键词】大肠杆菌，抗生素，耐药性。 鸡大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌（E.coli）的某些致病性菌株所引起的多种疾病的总称[1]。较常见的有大肠杆菌性败血症、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎等，并能导致鸡胚和幼雏死亡，近年来报道大肠杆菌还可引起脑型感染和肿头综合征[2]。肉鸡发生大肠杆菌后，轻者增重减慢影响生产性能；重者胴体商品性能下降甚至死淘增加，损失惨重，严重阻碍肉鸡业的健康发展。临床上对该病多采用抗菌药物进行防治，这一方面增加养殖成本；另一方面由于抗生素的不合理应用或滥用，助长了细菌耐药菌的产生，加剧了治疗和用药的恶性循环，使细菌对抗生素的耐药性增大、耐药菌株增多、耐药谱越来越广。特别是多重耐药现象的出现，不但给兽医临床带来了困难，而且对食品安全和人医临床也构成潜在的危害。因此，及时对细菌进行耐药性监测，了解和掌握鸡群中大肠杆菌耐药菌株的产生情况和耐药程度，对控制疾病的流行和指导生产合理用药具有重要意义。 1材料 1.1供试菌种 206份病料取自河北省某肉鸡集团公司，经临床症状和病理剖检初步诊断为大肠杆菌病的商品代肉鸡场。通过细菌培养特性、形态特征观察、生化试验和血清型鉴定，分离鉴定出160株E.coli。随机选取20株用于试验；质控菌为ATCC25922。 1.2培养基 Mueller-Hinton(MH)培养基，杭州天和微生物试剂有限公司生产，批号 20020524。 1.3药敏纸片 购自北京天坛中国药品生物制品检定所。共14种：头孢唑啉(CFZ)、氯霉素(CMP)、痢特灵（FR）、红霉素(ERY)、依替米星（ET）、庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、氟哌酸(NOR)、吡哌酸（PI）、奥格门丁(AMX/CA)、阿莫西林(AMX)、复方新诺明(SXT)、四环素(TET)、万古霉素(VAN)；另外恩诺沙星(ENR)、氟苯尼考(FLO)二种按文献自制[3]。 2方法 2.1药敏试验：采用WHO推荐的Kirby-Bauer法。测定标准NCCLS有关标准[4]，每次测定均以质控菌为对照。 2.2判定标准：按周廷宣[5]所述进行。抑菌圈大于20mm为极敏感，15～20mm为高敏，10～15mm 为中敏，10mm以下为低敏，无抑菌圈为不敏感。 3 结果 3.1大肠杆菌的耐药性：20株鸡源E.coli对16种药物中的AMX/CA、FR不产生耐药性；其次为CFZ、ET和KAN、FLO，耐药率分别为10％和15％；全部受试菌对SXT和PI高度耐药，耐药率为100％。详见表1。 表1 20株肉鸡大肠杆菌对16种抗生素的体外药敏试验结果 Tab1 Antibiotic resistance of 20 E.coli isolates from broilers to 16 antibiotics In vitro 抗菌素 Anti- biotic 极敏菌数 高敏菌数 中敏菌数 低敏菌数 耐药菌数 (占总菌数％) (占总菌数％) （占总菌数％） (占总菌数％) （占总菌数％） Extremely High Intermediate Low Resistant sensitive strains sensitive strains sensitive trains sensitive strains strains (% of total) (% of total) (% of total) (% of total) (% of total) CFZ 14(70%) 2(10%) 2(10%) 0(0) 2(10%) GEN 7(35%) 2(10%) 1(5%) 1(5%) 9(45%) KAN 10(50%) 2(10%) 3(15%) 2(10%) 3(15%) ET 10(50%) 4(20%) 2(10%) 2(10%) 2(10%) ERY 0(0) 0(0) 5(25%) 8(40%) 7(35%) FR 7(35%) 8(40%) 4(20%) 1(5%) 0(0) C 3(15%) 5(25%) 2(10%) 1(5%) 9(45%) TE 0(0) 0(0) 0(0) 4(20%) 16(80%) VA 0(0) 0(0) 3(15%) 1(5%) 16(80%) NOR 2(10%) 3(15%) 2(10%) 2(10%) 11(55%) PI 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 20(100%) ENR 0(0) 2(10%) 3(15%) 3(15%) 12(60%) FLO 8(40%) 5(25%) 2(10%) 2(10%) 3(15%) AMX 0(0) (5%) 2(10%) 3(15%) 14(70%) AMX/CA 7(35%) 1(5%) 10(50%) 1(5%) 0(0) SXT 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 20(100%) 注：括号内的数字表示耐药率 3.2大肠杆菌的多重耐药性：20株受试E.coli全部对16种抗菌药物中的多种药物有耐药性，无单耐菌株，一株对2种药物耐药，占5％；其余19株均表现对4种或4种以上药物耐药，占95％，其中一株可同时耐受13种药物，多药耐药率为12.5％～81.3％。4～5耐菌有3株（15％），6～9耐菌有14株（70％），12～13耐菌2株（10％）。7耐菌株所占比例最大为25％，其次是8耐和6耐分别为20％和15％。 表2 20株鸡源大肠杆菌的多药耐药性 Tab2 Multiresistance of 20 E.coli strains isolated from broiler chickens 耐药种数（多药耐药率％） Number of resistant drugs (rate of multiresistance) 耐药菌株数（占总菌数的％） Number of strains with resistance(rate of total strains) 2 (12.5) 4 (25.0) 5 (31.2) 6 (37.5) 7 (43.7) 8 (50.0) 9 (56.3) 12 (75.0) 13 (81.3) 1 (5) 1 (5) 2 (10) 3 (15) 5 (25) 4 (20) 2 (10) 1 (5) 1 (5) 3.3大肠杆菌的耐药类型：20株鸡源E.coli中，共有16种耐药类型，最普遍的耐药类型是g(SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-NOR)，其次分别为e(SXT-PI-TE-VA-ENR-NOR)、和j(SXT-PI-TE- VA-ENR-NOR-C-ERY)，耐药菌占受检菌数的百分率分别为15％和10%，其余耐药类型则较少，耐药菌占受检菌数的5％。 表3 20株肉鸡大肠杆菌的耐药谱型 Tab3 Antibiotic resistance patterns in 20 E.coli strains isolated from broiler chickens 耐药类型 Resistance patterns 命名 Name 耐药菌数(占总菌数的%) Number of strains with resistance (Percentage of strains) SXT-PI a 1 (5%) SXT-PI-AMX-GEN b 1 (5%) SXT-PI-AMX-GEN-ERY c 1 (5%) SXT-PI-AMX-C-FLO d 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-ENR-NOR e 2 (10%) SXT-PI-TE-VA-AMX-C f 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-NOR g 3 (15%) SXT-PI-TE-VA-ENR-NOR-ERY h 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-GEN-ERY i 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-ENR-NOR-C-ERY j 2 (10%) SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-NOR-GEN k 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-GEN-C l 1 (5%) SXY-PI-TE-VA-AMX-GEN-ERY-C-CFZ m 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-GEN-KAN-C-ERY n 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-NOR-C-GEN-KAN-FLO-ET o 1 (5%) SXT-PI-TE-VA-AMX-ENR-NOR-C-GEN-KAN-FLO-ET-CFZ p 1 (5%) 4讨论 4.1临床使用较多的药物，大肠杆菌对之的耐药性明显增加，如复方新诺明、四环素、红霉素、恩诺沙星等，耐药率在60％以上。而卡那霉素、庆大霉素、痢特灵对大肠杆菌的体外抑菌效果较好，极敏加高敏菌株分别为45％、60％和75％，原因可能与这三种药物口服吸收差，肠道内浓度高，临床主要用于肠道细菌感染的治疗，当伴有全身感染时需采用其他给药方式有关。使用较少的药物对大肠杆菌的抑菌作用较强，如头孢唑啉、依替米星极敏加高敏菌株在70％以上。这一结果符合“环境压力选择”促使细菌产生耐药性的理论。提示临床用药应尽量避免同一种或几种药物在某一地区长期使用，以免影响临床治疗效果及细菌耐药性的产生和扩散。值得一提的是氯霉素因对骨髓造血机能有抑制作用而被禁用，氟苯尼考为氯霉素类动物专用广谱抗生素，现已代替氯霉素在临床上应用，使用时间虽不长，但耐药性已开始出现，耐药率为15％，这一结果与陈志华等人报道[6]相符，应引起兽医工作者的注意。 4.2对细菌耐药类型进行研究，是进行流行病学调查，发现菌株流行标志的一种方法[7]。试验菌株全部对2种或2种以上药物耐药，其中对7种药物产生的多药耐药最严重，耐药菌占试验菌的25％(5/20)，多药耐药率为43.7％（7/16）；其次为8和6种，耐药菌的比例分别为20％（4/20）和15％(3/20)，多药耐药率分别是50％(8/16)和37.5％(6/16)。 通过20株大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药类型(表3)观察发现，对喹诺酮类(恩诺沙星和诺氟沙星)耐药的大肠杆菌，同时对氯霉素、红霉素、阿莫西林、复方磺胺、四环素、万古霉素等抗生素的耐药率多在50％以上。说明受试菌不仅对同一类抗生素中数种抗菌药物存在交叉耐药，而且对不同类抗菌药物存在严重的多重耐药。多药耐药现象的存在给本地区大肠杆菌病的药物防治提出了新的课题。 4.3近年来，药物研究工作者通过对抗菌药物的结构修饰以及不同作用机制的抗菌药物的联合使用，能够消除和控制由于大肠杆菌对抗菌药物作用位点的改变或药物作用表位的过度表达所引起的耐药。本试验中20株受试大肠杆菌对奥格门丁(阿莫西林/克拉维酸)全部敏感，而对单独阿莫西林的耐药率为85％。说明大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的主要耐药机制为产生β内酰胺酶,灭活β－内酰胺类抗生素。提示酶抑制剂与抗菌药物联合使用能够成功消除大肠杆菌中酶对抗菌药物的修饰和破坏所引起的耐药。相比之下，由于大肠杆菌对抗菌药物摄入的减少和主动外排增加所引起的耐药还没有取得很大的进展。研究发现[8-11]多重耐药菌株的大量出现，可能是菌体细胞膜通透性的改变与主动外排系统的超量表达共同作用的结果。因此，寻找有效的外输泵抑制剂是目前解决大肠杆菌多重耐药这一严重问题的当务之急。 参考文献 [1] 卡尔尼克,B.W. (高福, 苏敬良主译).禽病学.第10版,北京:北京农业大学出版社.1999, 158- 166. [2] 恽时峰, 郑明球, 潘震寰. 鸡胚源大肠杆菌的分离与鉴定. 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六次学术研讨会论文集. 杭州:家畜传染病分会.1995,328. [3] 曹澍泽等主编:兽医微生物学及免疫学技术.北京农业大学出版社.1992,49-54. [4] National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Pennsylvania:NCCLS,2001,1-123. [5] 周延宣,冉茂菊.鸡致病性大肠杆菌药敏试验.中国畜禽传染病.1995, 17(2):57-58. [6] 陈志华,刘富来,镠小群等.鸭大肠杆菌的药物敏感性试验.中国兽药杂志.2004, 38(12):23-25. [7] Abdelkader Amara, Zakia Ziani, Khalid Bouzoubaa. Antibioresistance of Escherichia coli strains isolated in Morocco from chickens with colibacillosis. Veterinary Microbiology. 1995, 43:325- 330. [8] John D. Goldman, David G. White, Stuart B.Levy. Multiple Antibiotic Resistance (mar) Locus Protects Escherichia coli from Rapid Cell Killing by Fluoroquinolones. Antimicrob Agents Chemother.1996.40:1266-1268. [9] Okusu H, Ma D, Nikaido. Acrab efflux pump plays a major role in the antibiotic resistance phenotype of Escherichia coli multiple-antibiotic-resistance (Mar) mutants. J Bacteriol. 1996,178: 306-308. [10] Nikaido H. Multidruge efflux pump of Gram-negative bacteria .J Bacteriol,1996,178:5853-5859. [11] Nikaido H. Prevention of drug access to bacteria targets: permeability barriers and active efflux. Science.1994, 264:382-388. |
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