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freshair33

[交流] 大家帮忙计算下这对引物的最优退火温度吧,5个金币咯

直接告诉我设置PCR程序时需要设置的温度即可,P出来了就把金币都给你啦!

Ps: 5‘- ATACC ATG GTA AGT AAA GGA TTT AGT ACC C-3′,

Pa: 5 ‘-ATAGGATCCTATTACTCAGCTCCAATTGT-3′

我不太会计算,有谁能帮忙算下,多谢!
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韦青青青

木虫 (正式写手)

相亲动车组

4. 优化退火温度 :退火温度的优化首先要采用几种方法中的一种来计算引物-模板对的Tm值,其中最简单的方法是Tm=4(G+C)+2(A+T),一个单一碱基的错配大约降低Tm值5℃。也可以采用更加复杂的公式,但实践中由于Tm值受缓冲液中各个成分甚至引物和模板浓度的不同影响,所以任何计算的Tm值都应该看作是大致值。进行退火温度的摸索时有一定间隔(2~5℃),从高到低直到低于Tm值5℃的一系列反应可以大致估计出给定条件下的最佳退火温度。

http://www.genecool.com/bbs/view ... amp;page=1#pid31270
绿衣捧砚催题卷红袖添香伴读书
2楼2008-03-14 11:11:00
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随风而过

银虫 (小有名气)

Ps: 5‘- ATACC ATG GTA AGT AAA GGA TTT AGT ACC C-3′,
用软件计算出来的温度是67.9度,建议你用63-65度试试。
Pa: 5 ‘-ATAGGATCCTATTACTCAGCTCCAATTGT-3′
用软件计算出来的温度是63度,建议你用58-63度试试。
3楼2008-03-14 11:42:22
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

引物合成的标签上会有的,应该是给出两个,选择NaCl浓度低的那个减3~5度,这个比较接近PCR是的体系条件

祝你好运
4楼2008-03-14 11:53:19
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