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mlacove

新虫 (小有名气)

[求助] northern 已有1人参与

我想请教,做northern的膜应该是尼龙莫,还是Nc莫,或者pvdf膜,我的microRNA大小是22bp,protocol里说尼龙膜,我第一次用了0.45um NC膜,点样之前样品忘记加热了,但带跑出来了,但是膜上没有任何东西,第二次加热样品了,但是染色后发现胶上除了marker,什么都没有,这是什么状况?求指教,
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流,PVDF膜好像是不行 2014-05-13 08:24:39
mlacove: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-09 19:20:27
你就这样做实验。。。
PVDF膜和NC膜根本不能做northern,且不说能不能结合,强度就不够。
Northern Blotting都是用Nylon membrane,而且都是positive charged!
baking可以有助于RNA与膜结合,但是这个太慢,效果也不好,现在都是用UV-crosslinking,直接把RNA跟膜化学交联。
2楼2014-05-12 22:15:38
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mlacove

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-12 22:15:38
你就这样做实验。。。
PVDF膜和NC膜根本不能做northern,且不说能不能结合,强度就不够。
Northern Blotting都是用Nylon membrane,而且都是positive charged!
baking可以有助于RNA与膜结合,但是这个太慢,效果 ...

初次做northern有些匆忙,做得预实验,之前我师兄做northern用的是Nc膜,说能看到带,所以我就用nc做得,也是交联,结果没出来,现在跑胶时都不出带了就奇怪了。
3楼2014-05-12 23:02:22
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