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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] ELISA测细胞摄取率,看明白想不明白!!!

收集细胞铺种于96孔板,铺种密度1万个/孔,继续培养一天,加药,次序为:5孔加入PBS(pH=7.4)为阴性对照,
5孔加入抗HIF-1 a单克隆抗体作为阳性对照,剩余孔分为两组:一组每孔加3uL
抗HIF-1a- PTX Pluronic P123免疫胶束(anti-HIF-1a-NMs-PTX),一组每孔加3
uLPTX Pluronic P123胶束(NMs-PTX),每孔补足样液至200uL,置培养箱中继
续培养1h,每孔以PBS洗涤3次,每孔加HRP标记羊抗小鼠IgG二抗(H+L)
(1:4000稀释)细胞培养箱中孵育,PBS洗涤3次,加定量TMB显色剂显色10min
2 mol/L硫酸终止显色,以酶标仪于450nm处检测所有样孔的吸光度,按以下公式计算摄取

二抗肯定是结合HIF-1 a单克隆抗体才对啊,然后NMs-PTX是怎么确定摄取率的?没接HIF-1 a单克隆抗体的胶束进入了细胞也不能结合二抗啊?
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