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小谢清风

金虫 (小有名气)

[求助] 三肽定性分析 已有2人参与

基本情况:手上有20种三肽样品,每一种样品都是只知道组成三肽三个氨基酸中的一种,现在想知道另外两个氨基酸是什么??我目前用API3000做了几个样品,采用的溶剂是甲醇和水以及少量的甲酸,发现分子离子峰不是很明显,无法确定三肽的分子量,所以很难去分析。现在我想要么做些修饰让分子离子峰强度高些继续用API3000测试(求方法),要不用液质联用或者气质联用测试,求各位说说三肽进行液质联用要注意的地方,尽量详细一点。谢谢
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、分子量太大,离子化不好,更换不同的离子源,比如说MALDI。
2、如果是ESI,注意分子离子可能是多电荷离子
3、通过加入TFA或者其他溶剂帮助离子化
2楼2014-05-11 21:33:03
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cpn

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小谢清风: 金币+10, 有帮助 2014-05-12 10:51:43
ls童鞋不用分析别人问了什么问题就可以应助了么?
三肽分子量会有多大?加TFA很容易抑制离子化信号,如果不是做液质,直接进样能不用就不要用(即使是做液质,也不要用超过0.1%)。lz有没考虑过你样品里面可能盐浓度比较高?或者是样品浓度不够?如果要做液质,用C载量比较高的柱子,3肽太短,如果刚好是极性很大的氨基酸构成的,在C18上保留可能很弱,液相起始得用很高比例的水相以期跟溶剂峰盐峰分开。如果你对液相峰形要求不高的话,甲醇0.1%的甲酸,水,当流动相,如果对液相有要求,就用乙腈,甲酸或TFA(一定注意量不要太高)均可。
3楼2014-05-12 08:56:18
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小谢清风: 金币+10, 有帮助 2014-05-12 10:51:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by cpn at 2014-05-12 08:56:18
ls童鞋不用分析别人问了什么问题就可以应助了么?
三肽分子量会有多大?加TFA很容易抑制离子化信号,如果不是做液质,直接进样能不用就不要用(即使是做液质,也不要用超过0.1%)。lz有没考虑过你样品里面可能盐浓 ...

加TFA会抑制离子化,但是我们做某些蛋白的时候必须有TFA,蛋白和普通化合物不同,有时候加甲酸效果反而没有TFA好。而且大分子化合物会产生多电荷离子,这就会使分子离子数改变,既然是应助,我会尽可能帮忙,如有什么错误,请及时指出,并给出相应理由,我也可以学习进步。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-05-12 10:22:23
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cpn

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-05-12 10:22:23
加TFA会抑制离子化,但是我们做某些蛋白的时候必须有TFA,蛋白和普通化合物不同,有时候加甲酸效果反而没有TFA好。而且大分子化合物会产生多电荷离子,这就会使分子离子数改变,既然是应助,我会尽可能帮忙,如有什 ...

好吧,童鞋,偶只是想说,lz求助的明明是三肽,很短的肽,即使是你后来补充回答的,也不一定是”某些蛋白“的case。三肽会存在分子量太大的问题么?既然是应助最好还是有针对性地回答。。
如有冒犯,请见谅。
5楼2014-05-12 11:22:14
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