| 查看: 1196 | 回复: 1 | ||
swimmingcrab铜虫 (小有名气)
|
[求助]
原位杂交 已有1人参与
|
|
各位虫友： 我最近想做石蜡组织切片原位杂交，到网上查了好多资料，但有几个问题还是没有查到，希望各位能帮忙解答下，不胜感激！问题有点乱，还请大家见谅。 1. 4%多聚甲醛需要现配现用么？该如何保存？我看到 2.固定好的组织是否可以经处理包埋后待用？还是每次实验都要取固定的组织进行脱水，透明，浸蜡和包埋？ 3.50%的去离子甲酰胺该如何配制和保存？ 4. 50%去离子甲酰胺/1×SSC是代表二者体积比1:1的混合溶液么？是要现配现用还是可以保存待用的？如果是，该如何保存呢？ 5.整个实验过程中多个步骤用到湿盒，比如杂交，蛋白酶K消化，加抗体等，每次湿盒里的液体都是一样的么？网上查到的实验步骤都没有提到湿盒里的液体是什么。 6. 探针使用前是不是需要用预杂液稀释后变性？具体如何变性？比如温度，时间？ 另外是先变性好滴加到组织上还是先滴加后一起变性？ 7. 杂交温度该如何选择？ 之前没有做过这方面的实验，有些问题可能比较外行，还请大家见谅，谢谢大家！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有160人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
【答案】应助回帖
|
1. 4%多聚甲醛需要现配现用么？该如何保存？ 提前一天配，60度溶解。另外最好用你的缓冲液配，如PBST等。保存于4度冰箱。建议瓶中少留空气，也就是提前算好体积，液体装满瓶子，拧紧瓶盖。10天的我用过，结果可以保证，再长就不知道了。 2.固定好的组织是否可以经处理包埋后待用？还是每次实验都要取固定的组织进行脱水，透明，浸蜡和包埋？ 不知道，没做过石蜡切片的原位。 3.50%的去离子甲酰胺该如何配制和保存？ 买的是100%的液体，买后4度保存很久。50%是配好试剂的终体积分数。试剂4度保存，最好现用现配。 4. 50%去离子甲酰胺/1×SSC是代表二者体积比1:1的混合溶液么？是要现配现用还是可以保存待用的？如果是，该如何保存呢？ 这一个比例没见过。一般不都是SSC终浓度5或6×么，因为钠离子浓度会影响探针结合效率，最好查明白protocal。SSC母液和稀释液我是4度保存的，无沉淀和晶体，使用效果还不错。 5.整个实验过程中多个步骤用到湿盒，比如杂交，蛋白酶K消化，加抗体等，每次湿盒里的液体都是一样的么？网上查到的实验步骤都没有提到湿盒里的液体是什么。 湿盒液体与玻片滴加的试剂的溶剂相同。比如缓冲液等。 6. 探针使用前是不是需要用预杂液稀释后变性？具体如何变性？比如温度，时间？ 另外是先变性好滴加到组织上还是先滴加后一起变性？ DNA探针一定要变性。RNA的经过比较实验，变性不变性没啥差别，建议不要变性。条件：80度10分钟。分别变性，降温后再杂交。 7. 杂交温度该如何选择？ 我用的65度，效果还行。温度还是要根据具体使用的材料来定。 推荐个帖子给你，我认为你可能会需要。http://www.ebiotrade.com/newsf/2014-5/20145694818349_2.htm |
2楼2015-03-16 01:10:08
