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smart 扩全长出现了单引物扩增的现象
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| 我在用SMRT 技术来扩全长的时候，合成双链CDNA后用自己根据中间序列设计的引物扩增的时候，发现了一个奇怪的现象。我用单引物R扩出来的带和我用SAMRT /R 引物扩的带形非常相似。而我用smart单引物扩时没有扩出东西。我同学分析可能是在一链CDNA合成的时候还有一些smart引物在体系中，到双链扩增时这少量的引物和R组成上下有引物。但是我在合一链时只加了1ul的10uM的引物，到二链扩增时它的含量差不多被稀释了500倍，这微量的引物还能起作用吗？请哪位高手指点一下，不盛感激！对了，还有一个奇怪的现象，我用上游引物和SMART 配以及用下游引物跟SMART配得出的条带居然也几乎一样！我真是想不明白了，哪位能解释一下。 |
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