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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA阳性，可Western Blot却是阴性?
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jing810203

铁杆木虫 (初入文坛)

[交流] ELISA阳性，可Western Blot却是阴性?

最近在作基因工程抗体方面的工作，但是发现一个奇怪的问题：ELISA检测是高表达的细胞株，Western Blot却是阴性的，这是为什么呢？请高手指点。
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1楼 2008-03-12 12:55:30
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
原理都是一样的，差别是western要转膜，是不是有问题？
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细推物理须行乐。
2楼2008-03-12 13:20:17
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biocore

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
引用回帖:
Originally posted by jing810203 at 2008-3-12 12:55:
最近在作基因工程抗体方面的工作，但是发现一个奇怪的问题：ELISA检测是高表达的细胞株，Western Blot却是阴性的，这是为什么呢？请高手指点。

很正常，有的抗体就是只适用于ELISA，而Western做不出来，如果用的是同一种抗体检测的话。
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3楼2008-03-12 18:40:05
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
抗体是识别线性表位的,有的是识别构象型表位的，识别构象型表位的抗体不能用于western blotting，因为在western blotting中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原，而蛋白质抗原的构象型表位变性时被破坏。
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细推物理须行乐。
4楼2008-03-12 19:18:12
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
一般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性；而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。做免疫印迹时选择抗体主要应考虑所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白.
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细推物理须行乐。
5楼2008-03-12 19:21:12
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xiaoyur

金虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
ELISA的阳性如何定性的？
会不会有相互之间的污染
还有的是假阳性，本底高
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爱的反义词不是恨 而是冷漠!
6楼2008-03-12 23:09:13
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jing810203

铁杆木虫 (初入文坛)
谢谢各位的回复。我ELISA检测所用试剂盒的原理是采用竞争抑制法的，所以定量也不是很准确，但是定性还可以。  
lauren180说得很有道理，能告诉我怎样区别识别构象特异性的抗体和识别氨基酸特异性的抗体吗？
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7楼2008-03-13 22:25:23
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sofu

金虫 (正式写手)
长知识了，多谢
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"An expert is a man who has made all the mistakes which can be made, in a very narrow field." -- Niels Henrik David Bohr
8楼2008-03-13 22:43:14
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