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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR检测组织表达特性实验的内参问题
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深海里的鱼鱼

银虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR检测组织表达特性实验的内参问题

本人现在要做组织表达特性实验，用RT-PCR技术。请问下各位高手内参是如何确定的？用actin,18SrRNA以及28SrRNA有什么区别？内参引物怎么确定？
有没有物种的差异性？
比较着急，谢谢了！Sample Text
[search]RT-PCR技术[/search]
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1楼 2008-03-11 19:38:10
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
其实问题不大,内参一般都用actin 18S或是Tubulin,物种之间可能有差异,但差异不大,最好能找到你所用材料本身的内参基因的序列,当然如果没有的话就只好去用保守区了,好像18S的保守性相当强,可以用通用引物,因为这些基因理论上讲是没有组织特异性的,引物最好是用primer设计一下,避免有dimer的形成,所扩的片段也不要太长,可以在三百到六百是比较理想的,像Tubulin可以设计跨内含子的,这样可以检测是否有DNA的污染
附,我们一般用的都是Tubulin和actin
做QPCR用18S
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2楼2008-03-11 20:12:09
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深海里的鱼鱼

银虫 (小有名气)
谢谢轻5飞扬，非常非常感谢！
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3楼2008-03-11 21:26:33
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