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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达，大肠杆菌添加IPTG后菌液渐变澄清
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lyta0

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-02 01:33:45
这事不奇怪。经常出现。
两个方面分析我建议
首先。你若是挑的单克隆。换个单克隆试试。这极有可能是这个单克隆的特性。
然后。如果换了还不行。换个骨架试试。这很有可能是细胞毒性的问题。换一个对leak控制更严 ...

谢谢建议，你说的更严格的载体是什么？， 还有表达系统？
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11楼2014-05-02 01:49:05
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寻尘

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-05-03 10:45:19
刚巧最近也碰到这种情况，我觉得应该不是蛋白对菌有毒性，因为后来发现我做的基因在载体上连反了……所以蛋白应该没表达
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12楼2014-05-02 23:27:33
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dingchaoyue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:45:48
lyta0: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-03 18:16:20
一、很有可能是噬菌体污染了。把你用的摇菌瓶等用醋酸消毒。
二、你操作过程污染了。
三、质粒重新转bl21活化，重新验证保菌再诱导。
d四、换超静工作台或者别的地方操作试试。
祝好运。

[ 发自小木虫客户端 ]
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13楼2014-05-03 00:08:02
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zyf0227

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:46:14
对菌液进行一下特性分析。
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14楼2014-05-03 00:52:29
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dalincn

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:46:32
本帖内容被屏蔽
15楼2014-05-03 09:00:23
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863828916

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:46:53
蛋白有细胞毒性，可以让它表达后排到细胞外去

[ 发自小木虫客户端 ]
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16楼2014-05-03 09:18:23
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
rossata 为薄壁细菌需要注意前扩大时间与后诱导时间和培养条件

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2014-05-04 07:57:55
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是所表达的蛋白具有细胞毒性吧  搞得菌都挂掉了
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18楼2014-05-04 15:59:51
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181587941

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不排除IPTG中带了噬菌体的可能。
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19楼2014-11-19 09:39:15
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